• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        免疫共沉淀实验,总是假阳性,该如何避免

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

        user-title

        Eason老歌迷

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        免疫沉淀的假阳性一般來自洗过的免疫沉淀物中存在的某些蛋白质,这些污染物在完整细胞内不与目的蛋白相互结合,但在细胞裂解后可形成非生理条件的蛋白质与蛋白质的相互作用,也可能来自抗体与其他非目的蛋白的交叉反应,(这在做western很常见),或者非特异性反应.为了排除这种假阳性可采用几种方法:一是采用几种不同抗体.如用几种不同的cmyc抗体去IP,可增加结果的可信度,另外也可以采用对照抗体,如与你的抗体同源的另外一种无关抗体,这样任何同你的抗体和对照抗体都结合的即为非特异结合.还有可以加大清洗液的盐离子强度,(如加入1mol/L的NaCl)可以减少一些非特异结合.当然在跑胶前要再用PBS洗一下沉淀物,因为高盐条件下可影响电泳.

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        找好的抗体,注意buffer的裂解力和ph值

        user-title

        未来9

        有帮助

        1、可能是抗体浓度高,降低抗体浓度;

        2、抗体特异性不好,换抗体;

        3、PCR污染,重新配置缓冲液。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序