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问
菌落PCR胶孔堵塞没有条带
汤姆卜丽波
不是的,那种情况是pcr产物里有蛋白质污染才会那样,在胶孔里,跑不下来
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问
求助:跑pcr整不出来?
Eason老歌迷
如果你测序有,但是扩增不出来,可能是模板dna被降解了?引物的浓度问题,引物设计的是不是合理等
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问
转座子反向PCR 的问题
天一湖医者
查一下LM-PCR,按照步骤做就好,也有可能是你引物设计的不对,要仔细分析序列。
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问
RT-pcr,整出来是一条直线,怎么回事?
whilt-shirt
有可能是程序原因,你可以先逆转录,然后再PCR试试。
4 回答
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问
反转录pcr试剂盒中随机引物合成片段的原理是什么,大小会不会不一样
bamboopiggy
随机引物:某些特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列,比较难以转录成全长序列时,可采用非特异的随机引物来转录全长mRNA。选择这种引物,体系中所有RNA分子会全部充当DNA第一链模板,然后PCR引物在下游扩增过程中再扩增特异的目的基因。通常,用此引物合成的cDNA中,96%来源于rRNA。Oligo(dT):绝大多数真核细胞的mRNA具有3’端Poly(A+)尾,所以使用Oligo(dT)仅mR
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问
Trizol法提取的Rna模板不经过dna酶消化可以直接用于rt-qpcr吗
whilt-shirt
可以直接用,但是可能会有污染。
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问
巢式PCR是利用PCR的产物又进行了一次PCR吗?巢式PCR的产物在跑胶时样品不进胶是怎么回事,试过调Ph值,但是不管用
汤姆卜丽波
可能不是ph的问题,有可能是pcr产物蛋白污染了,所以在孔洞里不进胶
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问
菌液Pcr反应中,一般最少多少个循环可以得到可视条带的浓度。
whilt-shirt
一般35个循环就能看到条带了。
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问
关于探针特异性的问题
bamboopiggy
优先考虑探针位置 • 探针的5'端第一个碱基不能是G • 基因表达探针Tm值:68-70C;基因分型探针Tm值:65-67C • TaqMan探针长度13-30bp,TaqMan-MGB探针长度在13-25bp • 避免同一碱基重复过多,特别是连续4个或更多的G • C比G多的探针效果更好,如果C少于G,选择其互补链 • 多态位点应尽量位于探针中央,可以±3个碱基
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问
请问测提取的核酸浓度时,260/280在1.8-2.0之间,但是260/230很小,只有1.1左右,这样测出来的值可以用吗?
whilt-shirt
可以用的,主要是看浓度和260/280的值。
4 回答
455 围观
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问
PCR的适用范围和主要针对对象是毒性实验吗
天一湖医者
不是的,PCR的适用范围和主要针对对象不仅是毒性实验,还有其他很多方向。
3 回答
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问
请问引物设计大家都是怎么做的呀?我看有公司设计的有自己设计的,那可以用文章里的引物序列吗?
whilt-shirt
可以用primer bank,也可以用文章里面的,但是会有问题
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732 围观
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问
大家好,我的内参ct值为19,目的基因为13,请问我还能继续稀释模板嘛?
whilt-shirt
你这个情况可以再稀释2-4倍。
4 回答
297 围观
4 回答
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问
如何用QPCR数据检测基因的表达丰度
whilt-shirt
先提取RNA,逆转录成cDNA,然后根据说明书加入qPCR试剂,上级,等机器检测完就能看到结果了
3 回答
1088 围观
3 回答
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问
提取烟草RNA一定要液氮吗?
dxywode
其实是提取烟草的RNA,看基因的表达量,因为比较老了,要加液氮来磨才能充分破碎。
4 回答
727 围观
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问
做rtPCR有哪些特别重要的影响结果的关键因素?
whilt-shirt
DNA酶的影响,试剂,加样手法等都会影响结果
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问
跑定量内参cq 值在30-31之间,复孔差值小于0.2,数据还能用吗?
whilt-shirt
一般内参的Cq值超过24就可以认为核酸降解了,这时候的数据是不能用的
5 回答
963 围观
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问
PCR产物量过少的原因是什么
whilt-shirt
有可能是引物特异性不强或者试剂有问题
5 回答
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问
请问有没有能够快速评价引物的质量以及评价一对引物是否匹配的软件或者在线网址?
balalaLy
primer/oligo/dnaman
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问
请教:细菌病毒的核酸怎么不能用A260鉴定提取好坏?
汤姆卜丽波
核酸提取好坏的鉴定是根据260/280以及260/230的,不单单是 260
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