丁香通
丁香园
论坛
医药招聘
丁香医生
更多
调查派
用药助手
丁香搜索
医药数据库
来问医生
我要登录
|
免费注册
|
我的丁香通
企业机构:
成为企业机构
个人用户:
个人中心
移动端
搜实验
大家都在搜
大家都在搜
0 人通过求购买到了急需的产品
免费发布求购
搜索
发布求购
实验专区
实验库(10000+)
实验问答
实验专题
热门视频
前沿资讯
科研者之家
丁香通
>
实验专区
>
实验问答
>
全部
实验问答
31,956,206 科研人在看
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
wb实验有一组内参Gapdh爆不出来
balalaLy
其它样品都出来了,那就说明是样品本身的问题,蛋白量低,或者是你煮蛋白前忘记加蛋白了
7 回答
1516 围观
7 回答
1516 围观
去回答
问
qpcr的结果求助?
Eason老歌迷
做的挺好😄。很棒。还是要提醒你一句。设计引物有几个需要注意的点。如下:产物不能形成二级结构。引物长度一般在15~30碱基之间。G+C含量在40%~60%之间。引物自身不能有连续4个碱基的互补。引物5′端可以修饰,引物3′端不可修饰。引物3′端要避开密码子的第3位。等
4 回答
981 围观
4 回答
981 围观
去回答
问
求助|荧光定量这样的结果是不是意味着目的基因未表达
dxy_dfr562pw
如果操作和引物探针确定没问题的话,应该是没表达啥目的基因了……
5 回答
450 围观
5 回答
450 围观
去回答
问
染料法qPCR 为什么扩增曲线到达平台期后会出现下降?会影响结果吗?
whilt-shirt
有可能是模板和引物浓度太高导致的,这种情况会使基因表达偏低
3 回答
2054 围观
3 回答
2054 围观
去回答
问
关于RNA纯度的问题?
天一湖医者
不可以,因为RNA纯度包括样品的纯度和自身的完整性。
4 回答
1071 围观
4 回答
1071 围观
去回答
问
OD260/OD280的值出现NAN/INF是什么意思
天一湖医者
NAN无效数字INF无穷大说明有问题,建议重新试试。
3 回答
862 围观
3 回答
862 围观
去回答
问
肺克 pfge 条带模糊跑不出来
天一湖医者
从这张图上看,加样孔不是太亮,你加的细菌的量可能有点少,就是细菌的浓度有点低,如果切开的话,很多条带也会很模糊;.可以设置对照孔,加酶和不加酶的,同时设置多组时间酶切,以节省时间;
3 回答
792 围观
3 回答
792 围观
去回答
问
对于pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的根本区别在哪里?
dxywode
一、方法不同1、普通pcr引物设计:引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、荧光定量pcr引物设计:通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,标记跟踪PCR产物进行实时监测反应,利用与之相适应的软件对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度二、原理不同1、普通pcr引物设计:为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。2、荧光定量pcr引物设计:在PCR反应体系中加入荧光基团
3 回答
1311 围观
3 回答
1311 围观
去回答
问
qpcr和RT PCR在定量定性上面有什么区别?
Eason老歌迷
RT-PCR是PCR的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为cDNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物,使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。实时PCR属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。他俩相结合,能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗
7 回答
6701 围观
7 回答
6701 围观
去回答
问
发文章时pcr实验要哪些原始数据
Eason老歌迷
可能需要你的原始图片,甚至还有荧光定量的数据。或者一些溶解曲线,之类的。
6 回答
16667 围观
6 回答
16667 围观
去回答
问
做qPCR曲线出现异常?
whilt-shirt
有可能是模板浓度太高了,在基线期内就起峰了,仪器会默认起峰的线条仍为基线部分,将扩增曲线往基线位置下拉,因此你的曲线就趴下来了。这种情况大家也不要慌,可以减小基线终点(例如基线期默认 3 - 15 个循环,改为 3 - 10 个循环),重新分析数据,一般都能得到一个比较好的结果。
5 回答
1255 围观
5 回答
1255 围观
去回答
问
DNA扩增的时候,PCR条带拖尾?
dxywode
拖尾在生物专业词汇叫做smear。造成此的原因有多种。一般来讲,有以下几点:1,引物设计不佳,造成了拖尾现象。2,PCR中DNA浓度加的太多,造成了拖尾。3,mg2+浓度加的太高,造成了拖尾。4,跑胶电压不合适,造成了拖尾。5,退火温度不合适,造成了拖尾。这些都可能造成拖尾,请认真分析之。谢谢。
5 回答
6501 围观
5 回答
6501 围观
去回答
问
有没有大佬知道PCR 突然扩增不出产物是什么原因?
Eason老歌迷
可能是以下原因导致的,你可以看看模板DNA是否被降解,引物浓度是不是合适,自己再那个说明书的浓度范围再设置一个范围去摸索一下。或者你的引物设计是不是合适。
6 回答
1140 围观
6 回答
1140 围观
去回答
问
如何建立稳定铂耐药的卵巢癌细胞?是否需要先检测敏感细胞的IC50?检测IC50的规范操作是什么?
balalaLy
先检测IC50,再用比IC50高的大剂量冲击,接着用IC50的剂量维持一段时间,再重新测IC50
3 回答
593 围观
3 回答
593 围观
去回答
问
关于gDNA基因组DNA
汤姆卜丽波
一般pcr.扩增模板浓度几ng到100ng都可以,普通的酶就可以扩出来,应该不是浓度的问题,跑之前确定一下模板没有降解,然后引物特异性和有效率
5 回答
2187 围观
5 回答
2187 围观
去回答
问
牛卵母细胞wb一抗好难找呀,买了几个都做不出条带 什么原因求大神指导!
汤姆卜丽波
可以看一看相关的文章,看看文章里的抗体是在哪里买的,问通讯也可以
3 回答
607 围观
3 回答
607 围观
去回答
问
加尾法逆转录miRNA的qPCR如何区分前体和成熟体?
汤姆卜丽波
前体和成熟体的大小序列都不一样。除非你特别设计不同引物,不会一起扩增
4 回答
783 围观
4 回答
783 围观
去回答
问
半定量PCR和定量PCR在斑马鱼这类模式生物上的类似实验自己可完成吗?还是需要专业设备
汤姆卜丽波
就和其他生物一样操作就可以了,组织取核酸,不需要专业设备
4 回答
487 围观
4 回答
487 围观
去回答
问
做了一次,因为我的细胞增殖速度很慢,培养24h基本没有增殖。所以我铺板的细胞密度挺大的,每孔3*10五次。铺板后第二天换低血清培
balalaLy
你的药物会干扰cck8的结果,加cck8之前最好还是要洗一下。如果药物促凋亡效果明显的话可以不做饥饿处理。
3 回答
815 围观
3 回答
815 围观
去回答
问
关于随机引物反转录的一些问题
Eason老歌迷
你想纯化,但是发现没有过滤掉短的,是这样吗?我有一个方法,可以试一试。1. 20μLPCR产物加入5 μL 5M的NaCl(终浓度0.5 M)。2. 加入25 μL 24%的PEG8000溶液(终浓度12%);混匀。3. 4度放置30 min。4. 4500 g,4℃离心30 min 后,立即将板反扣在厚的吸水纸上,离心至150 g,去除上清。5. 加入70 μL 75%EtOH,4500 g,4
3 回答
983 围观
3 回答
983 围观
去回答
1
•••
710
711
712
713
714
•••
1015
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
领取干货资料
反馈
TOP
打开小程序