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        求大神给分析一下pcr失败的原因

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        哇哈哈哈321

        我用的kod fx酶,扩增的目的基因大小大约9kb左右,按照酶的使用说明书设置的pcr程序,加的各种试剂也是按照说明书来的(没有镁离子),但是跑完胶没有我要的目的基因(引物是找公司设计的),是提的DNA有问题吗?

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        4 个回答

        user-title

        dxy_g9y5gije

        有帮助

        考虑三个方面

        第一是DNA,内参基因验证

        第二是TM值,设置温度梯度

        第三是引物,多试几条引物

        挨着验证

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        模板浓度过低。退火温度过高。有可能,可以做个梯度PCR试一下。循环次数过少或延伸时间过短以致目的基因扩增量不够。这个可能性不大。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你的dna模板是genomic dna吧?9KB确实有点长,感觉是你的模板太长了,结构复杂,你可以试试多片段克隆然后组合到一起。

        user-title

        灵枢天问

        有帮助

        有可能是DNA.的问题,你可以跑个胶验证一下大小,看看浓度怎么样,也有可能还是引物的问题

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