实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问我设计的引物为：上游引物：TCC CCCGGG ATGGCTCCACTTCACGAATC下游引物：ATAAGAAT GCGGCC

bamboopiggy

你能不能换个酶？你选的这两个酶，全是GC的，本身就会导致TM值升高，再加上上游起始序列中GC含量也比较高，所以你换个酶比较合适。

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问荧光定量PCR熔解曲线出现多峰是什么原因？怎么解决？

bamboopiggy

一般情况是引物不特异，可能有多个产物。不能用，换个引物。

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问PCR实验中菌落PCR检测有条带，接种大摇后无条带

bamboopiggy

一般菌落pcr，可能会存在插入片段也转入菌种，但是没有和载体连接成功。所以一般做完菌落pcr以后，先要送测序，测序成功，才大摇比较合适。

3 回答1197 围观

问PCR实验中扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散

bamboopiggy

可能产物不特异，出现多条带，但是片状弥散，可以考虑灌胶不匀，尤其是在胶中直接加入EB或GV的情况下

3 回答143 围观

问跑qPCR，内参基因和目的基因CT值正常，结果也比较理想，但内参基因熔解曲线呈较宽的单峰，Tm比目的基因熔解曲线低很多，有效吗？

bamboopiggy

看图，感觉两个melt curve 底边是一样宽的，但是你如果觉得内参基因的宽，可以考虑换一个大家常用的内参基因试试，一般情况，内参基因不会出现这种问题。

3 回答832 围观

问如何判断pcr仪器的样本加热模块是否被污染啊？

bamboopiggy

从你做出的结果分析，如果有个孔漂的太厉害，要么是热盖的问题，要么就是孔被污染了

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问求问qPCR的引物如何设计，一般选择哪段序列，探针法和燃料法有什么区别？

Eason老歌迷

我们聊一聊探针法和染料法的区别。通过探针可以增加反应的特异性，只有探针结合的片段上发生扩增才能收集到信号，能够预测和提前进行反应条件的优化，它的缺点是要合成探针，成本比较高。染料法呢比较经济，可以做溶解曲线，分析全部PCR产物的M值，缺点就是特异性没有探针法高。

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问用EdU检测肝癌细胞的增殖一般孵育多久呀

天一湖医者

用EdU检测肝癌细胞的增殖一般孵育2小时

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问求问各位学霸原代足细胞的问题

bamboopiggy

肾脏足细胞可以传代，理论上是可以冻存的，你可以取部分试试，因为没有具体做过，只能理论分析。但是查到网上卖足细胞的，用冻存液保存，所以应该问题不大

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问求助 | 酿酒酵母EBY100和质粒pYD1

bamboopiggy

pDY1 可以直接转EBY100。pYD1 是酿酒酵母的配套质粒，你如果想试试可以试试，但是我感觉不配套使用，产量会低很多

3 回答963 围观

问为啥这个文章要在CDS这样靠后的区域去设计sgRNA呢？

bamboopiggy

全文没有读过，但是看这个表述，设计gRNA的位置靠近跨膜区，是不是主要为了影响跨膜区的那一段啊？

2 回答337 围观

问做动物存活率实验，一次给药太猛了，分次给药剂量如何确定？

bamboopiggy

你可以参考临床病人用这个化疗药的间隔周期，来使用。

3 回答1304 围观

问裂红液过期了会有什么后果？

bamboopiggy

这应该不是裂红液的原因，可能你离心以后，沉淀重悬有问题

3 回答512 围观

问PCR实验过程中产物在凝胶上呈Smear状态拖尾怎么办

丁香木木

提高退火温度、重新设计引物、提高特异性

4 回答903 围观

问当多种病原微生物混合在一起时，用PCR反应管可同时检出多种病原微生物，怎样分解出特定的病原微生物？

bamboopiggy

你都混在一起了，是不是想说怎么分解出特定的pcr产物？这个你可以根据你的目的，设计特定的primer来进行pcr

3 回答528 围观

问sw620形态正常吗

天一湖医者

从图片上看，这个sw620形态还是正常的。

2 回答389 围观

问想问问这个算不算有抑菌效果呢？

灵枢天问

可以做一个菌落计数，菌落比正常组少的值有统计学差异就算

4 回答195 围观

问干细胞成脂诱导胰岛素来源

bamboopiggy

我直接用的从临床买的胰岛素注射液可以用，看你的干细胞吧，如果是人的，最好用人胰岛素

2 回答371 围观

问帕金森模型造模予腹腔注射MPTP（30mg/kg）换算成注射体积是多少 ml/10g？

天一湖医者

换算成注射体积可以乘1.44左右。如上30mg/kg,则换算为43ml/10g左右。

2 回答806 围观

问BV2细胞从公司买的，复苏以后长伪足，正常吗？还可以继续用吗？

天一湖医者

复苏以后长伪足，不正常。不可以继续用。

4 回答693 围观

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