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问
Trizol法提取的Rna模板不经过dna酶消化可以直接用于rt-qpcr吗
whilt-shirt
可以直接用,但是可能会有污染。
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问
菌液Pcr反应中,一般最少多少个循环可以得到可视条带的浓度。
whilt-shirt
一般35个循环就能看到条带了。
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问
请问普通PCR和RT-qPCR大家都做吗?还是只做一种,如果两个实验结果对不上怎么办?
天一湖医者
实时定量PCR和半定量PCR结果不相同很正常,毕竟半定量PCR的误差很大,在做半定量的时候,你一定要把内参基因调的,在各个组织中表达量是一样的,这样才能做目的基因。而实时定量PCR就不存在这样的问题,所以我觉得还是你的半定量可能调的cDNA没有调好。
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问
请问测提取的核酸浓度时,260/280在1.8-2.0之间,但是260/230很小,只有1.1左右,这样测出来的值可以用吗?
whilt-shirt
可以用的,主要是看浓度和260/280的值。
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问
请问引物设计大家都是怎么做的呀?我看有公司设计的有自己设计的,那可以用文章里的引物序列吗?
whilt-shirt
可以用primer bank,也可以用文章里面的,但是会有问题
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问
大家好,我的内参ct值为19,目的基因为13,请问我还能继续稀释模板嘛?
whilt-shirt
你这个情况可以再稀释2-4倍。
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问
如何用QPCR数据检测基因的表达丰度
whilt-shirt
先提取RNA,逆转录成cDNA,然后根据说明书加入qPCR试剂,上级,等机器检测完就能看到结果了
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问
做rtPCR有哪些特别重要的影响结果的关键因素?
whilt-shirt
DNA酶的影响,试剂,加样手法等都会影响结果
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问
跑定量内参cq 值在30-31之间,复孔差值小于0.2,数据还能用吗?
whilt-shirt
一般内参的Cq值超过24就可以认为核酸降解了,这时候的数据是不能用的
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问
RNA 提取260/230比值在1.7这样,能反转录做荧光定量吗?
balalaLy
有点偏低,估计是乙醇没有挥发掉,但还是可以做的。
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问
构建载体一直构建不上,可咋整?
天一湖医者
1.确保克隆到的基因完全正确:如果这一步出问题,无非两点原因:引物设计不合理,模板质量不高。解决方法:多找几个模板同时进行克隆;重新评估引物的合理性和特异性,比如将引物长度增至40 bp左右。2.关于酶切酶切其实要求并不十分严格,正常操作下,不论电泳检测是否十分清楚,酶切产物足够连接用量了,没必要纠结。
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问
酿酒酵母基因敲除菌液pcr没有条带
急诊科ys
1排除细菌污染可能2提取过程是否存在问题,必要时可重新提取进行实验
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问
载体构建时遇到了问题
汤姆卜丽波
这应该是酶切位点不太对,没有在产物头尾,在产物中间
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问
构敲降质粒,测序结果比对,两个酶切位点和载体序列都对上了,只有合成的敲降序列后半段不对 。是单链退火有问题还是公司合成的序列不对
天一湖医者
序列的方向需要验证,因为TA是随机插入到载体里面的。所以先用一个载体引物和你的insert引物配对检测得到正确方向插入的clones。
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问
请问各位大神,公司卖的PCR Mix真的比自己按照比例配置的PCR Mix 优秀很多吗?有没有人对比过?
汤姆卜丽波
实际来说如果自己配置的已经调试好了,那效果要比mix好一点,mix.主要是方便,减少误差
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问
【求助】2型糖尿病小鼠成模标准
汤姆卜丽波
葡萄糖耐量测试(OGTT)比空腹血糖监测更有诊断意义:实验前禁食12h,用20%葡萄糖溶液(2g/kg)灌胃,于空腹、服糖后30、60和120min定时鼠尾采血测定血清葡萄糖含量,空腹血糖高于7.00mmol/L,和试验后2小时内随机血糖高于11.10mmol/L即为糖尿病
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问
有没有人有RIG-I(DDX58)这个基因的过表达载体呀?
汤姆卜丽波
这个还是找公司设计,自己做起来很麻烦,或者你们课题组有做这个的,也可以问问
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问
细胞实验中D-半乳糖用什么溶解可以配置高浓度的母液?就是可以直接在细胞培养的过程中进行干预
whilt-shirt
可以先用DMSO配制高浓度母液,然后用培养基稀释到所用浓度
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问
肺上皮细胞HBE在逐渐传代的过程中细胞失去形态
汤姆卜丽波
可能是消化的太狠了,或者就是细胞老化了
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问
求问大家这个细胞是什么污染,哭了哭了,都没法做实验了
汤姆卜丽波
与细胞共存的污染物,多半是支原体
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