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问
质粒转染,PEI的用量与细胞数有关,还是与质粒数有关?PEI的量不能超过多少?
bamboopiggy
和质粒的量有关,和细胞的数目也有关,一般细胞融合度到50%-60%开始做转染,按照不同的比例如1:2-1:8的比例来配转染试剂。
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问
如果蛋白部分发生磷酸化使用普通的一抗所呈现的蛋白条带包含磷酸化后的蛋白吗?
bamboopiggy
您所谓的普通抗体是指的total的抗体吧?total抗体包含所有的修饰后的蛋白和未修饰的蛋白。
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问
做WB实验时一侧条带比另一侧条带浅是什么原因?
bamboopiggy
转膜没转好,三明治夹心的夹子可能变形了,或者是抗体加的不匀,
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问
有没有用过磁珠分选大鼠脑原代细胞
天一湖医者
磁珠分选大鼠脑原代细胞的初步研究。
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问
样品-80度保存,7天前做过条带有 前天再做条带很模糊,怀疑一抗失效把显过影的这张膜敷了一次新配的一抗还模糊 一直用预制胶。为啥
balalaLy
虽说反复冻融蛋白会降解,但经验证明冻融个4,5次是没有多少影响的。所以你的这个应该不是样品的问题,抗体和预制胶的问题比较大。预制胶虽然是商品化的,但是也不是万无一失的。要敢于质疑
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问
质粒导入载体失败咋办?
天一湖医者
排查问题的话,先查酶有没有问题(连接酶连别的片段和载体试试看,还有酶切产物纯化后直接转化看长多少菌落来判断酶切是否成功),然后插入片段可以用TA克隆去测序看是不是PCR成功。
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问
配好的SDS PAGE胶,分离胶和浓缩胶之间总是有气泡咋搞?
养点鱼吃火锅
分离胶做完后加无水乙醇找平,等凝固以后倒掉,把无水乙醇吸干了吗?或者是配胶的配比不对?
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问
新配的WB一抗才用一次就有沉淀
汤姆卜丽波
是不是用的溶剂有问题,保证溶剂不污染
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问
该怎么设计实验呢?
天一湖医者
如果A不是基因表达产物,只是外源物质,可以通过时间和剂量效应实验证实A对B的直接调控,如果A调控B具有时间依赖性和剂量依赖性,则A调控B表达结论成立。
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问
【求助】如何判断 Stripping Buffer 的洗脱效果?
Eason老歌迷
就我的经验来看,时间越久、次数越多、温度越高,洗脱的效果就越强。你可以通过以下方法来判断效果,先试试只洗一次,如果洗不掉,可以尝试升温和延长洗膜时间。你可以看哪个抗体条带染得最深最不好洗,你就用它开刀
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问
westrn blot新手,请各位帮忙看看目的条带上为啥有这么多黑点
Eason老歌迷
一般不会出现这么多黑点点,你这个是封闭液的牛奶没混匀吗,取的上清液吗?或者你是不是抗体没孵均匀啊!你放摇床上摇了吗?
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问
求助:皮肤组织提RNA,难以研磨
dxy_gwrp7ndq
可以组织样品液氮研磨成粉末状,在液氮基本挥发完时,直接在研钵中加 Trizol 试剂继续研磨,由于 Trizol 试剂中含有强烈的 RNA 酶抑制剂,组织样品和 Trizol 充分研磨混匀后能有效抑制 RNA 的降解;再将混合物转移到玻璃匀浆器中进一步匀浆,能使组织中的 RNA 充分释放出来,提高 RNA 产量。在将实验室温度控制在25℃以下的条件下,操作过程尽量在冰盒上操作,避免温度升高加速 R
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问
溶解曲线异常
Eason老歌迷
可能有几个原因。主峰前面出峰的话,是引物二聚体,而如果主峰后面出峰的话,一般的是非特异性的大片段的扩增。改变引物浓度,退火温度和镁离子浓度试一试。
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问
求助,成纤维细胞敲除常用的Cre酶有哪些。
秋秋欣欣
Cre重组酶,beta内酰胺酶
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问
蛋白测序与mRNA测序具体应用方面有啥差别?
汤姆卜丽波
这个要根据你的实验目的,比如在研究DNA甲基化或者转录水平的调控时,只检测mRNA表达就可以了,但要研究某个基因功能的时候,通常要用到的过表达敲低技术时,检测其蛋白的表达将会比检测mRNA更有说服力,因为只有该基因表达成蛋白了,才能行使其生物学功能,从而对下游基因或细胞产生影响。对于检测临床标本或者动物组织中的基因表达,如果同时检测mRNA和蛋白并得到一致的结果将会更有说服力。
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问
想问一下以下条带不出还有孔间间隔黑乎乎的是什么原因啊,不止出现过一次了,怎么调整好?
Eason老歌迷
你这是不是孵二抗时间太长了啊!一个小时就够,你这感觉是孵太长时间二抗了,我之前也遇到过这情况。
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问
目的条带很细(前几次都是正常粗细的条带),怀疑是一抗失效(国产的一抗用了5次左右),重新配了一抗重新孵,还是很细,请问原因是什么
Eason老歌迷
你前几次和这一次上样的量差别大吗?然后你电泳的时间长短呢?你制作的胶浓度和之前有变化吗
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问
请问刚收到的冻存细胞已完全融化,运输箱内干冰已全部挥发,此时将细胞放入-80保存,第二天进行复苏,细胞还能活吗?
府宅
对于干冰运输的冻存细胞,若干冰已经完全融化,请立即将细胞复苏培养,切勿再次低温冻存,再冻存细胞大概率不能活
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问
Balb/c小鼠脱肛怎么办?
府宅
手工复位直肠,荷包缝合肛门,留一小孔排便
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问
重组蛋白用于体外细胞培养时内毒素标准相关问题
JCorona
1.内毒素对细胞是有影响的,尤其是免疫相关的细胞,例如RAW264.7;2.一般推荐内毒素的浓度低于5EU/mL
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