目的条带很细(前几次都是正常粗细的条带)，怀疑是一抗失效(国产的一抗用了5次左右)，重新配了一抗重新孵，还是很细，请问原因是什么

你前几次和这一次上样的量差别大吗？然后你电泳的时间长短呢？你制作的胶浓度和之前有变化吗

一般细也没有关系，趋势一致就可以。浓缩胶少配一些看看呢

考虑一下是不是你胶的浓度不一样了？还有就是running buffer是不是有问题，如果都没有问题，是不是样品浓度不一样了

抗体失效一般就是不出条带，有条带说明抗体没问题，粗细跟你的蛋白变性之后压缩有关，可能跟loading中巯基乙醇的含量高，也跟蛋白量有关。