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问
小胶质细胞标记物IBA1跑不出来
bamboopiggy
胶用15%的,转膜时间改为300mA,至少要1h,或者2h也可以
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问
我做PCR实验,有关引物的问题?
bamboopiggy
如果不加模板也能扩增出目的条带,就是说明引物或者你加进去的东西中的某一样污染了
3 回答
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问
WB转膜时间与分子量及胶厚度的关系?
bamboopiggy
蛋白分子量越大,胶越厚,转膜时间越长
4 回答
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问
Western Blot实验40V转膜12小时,时间太长了?有什么影响吗?
bamboopiggy
转膜一般是恒流300/400mA,然后1-2个h就可以。如果您的电流是低的,转12个小时也没有问题。
4 回答
1815 围观
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问
wb实验跑完结果还不错,但是发现中间有个泳道没有加样,我出图的时候可以把中间那个剪切掉吗?这算不算做假图呢?
秋秋欣欣
可以把中间泳道剪掉,重新显影。
3 回答
589 围观
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问
wb实验,出的条带是这样的,该怎么改善,
bamboopiggy
下面这条带ok,上面那条带,建议切宽点,然后抗体浓度加大一倍
3 回答
561 围观
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问
SYBR GREEN I染料需要严格避光吗?
bamboopiggy
不用那么严格,就是加好板子以后,如果不能立刻上机,最好避光保存。加板子的时候不用
6 回答
3621 围观
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问
wb实验,应什么软件可以分析不同蛋白的表达情况?
balalaLy
一般用imageJ软件,直接网络搜索,有非安装版,非常好用
4 回答
1058 围观
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问
制作划痕实验 细胞密度可以是多少为合适?
bamboopiggy
大概80-90%的细胞融合度,然后划痕后,记得换液
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2642 围观
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问
荧光定量qPCR的重复性好吗?
bamboopiggy
复孔是需要的,如果一个板跑不开内参和目的基因,可以分两个板跑,但是要求时间间隔不能超过一周,并且必须用同一台机器
6 回答
1046 围观
6 回答
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问
做蛋白半定量怎么能标定的一致?
bamboopiggy
用内参,内参一般用的是管家基因,但是不同的处理,可能需要选择不同的内参
4 回答
484 围观
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问
在跑wb的时候,条带都连到一起变成一条线是怎么回事?
bamboopiggy
孔太密了,上样量太大了,导致感觉连到一起了
7 回答
2097 围观
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问
wb实验过程,想分析蛋白蛋白的表达情况,上样体积是否一致?
balalaLy
上样体积要求尽量一致,是为了保证每个孔在跑的过程中压力一致。不然隔壁孔的蛋白会往旁边体积少的地方歪。
4 回答
3203 围观
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问
怎样可以让人源性星状细胞LX-2细胞能长快一点?加用细胞因子TGF-β刺激会有效果吗?或者加大培基的FBS总量?
bamboopiggy
用进口血清,如果长的太慢,可以考虑提高血清浓度到20%
3 回答
385 围观
3 回答
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问
请问WB条带出现中间部分空白是什么原因?是转膜导致的吗?
balalaLy
如果是圆的那种空白就是转膜的时候有气泡。
5 回答
1814 围观
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问
RNA的提取时260\230
bamboopiggy
可能你提取的rna的浓度低,导致260/230比值的差异小,从而值不好
4 回答
3893 围观
4 回答
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问
做pcr的时候曲线没有峰值,出来的数每个孔差异很大,怎么解决
bamboopiggy
1.确定机器是好的,2,确定引物能用 ,3加样的枪和枪尖要match
3 回答
488 围观
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问
细胞迁移侵袭实验求助
bamboopiggy
侵袭和迁移的细胞一般铺的多少就不一样,这两者之间没有可比性。只要你的实验组和对照组有差别就可以。
3 回答
855 围观
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问
WB蛋白孵育
汤姆卜丽波
试着缩短一点一抗的孵育时间,多洗几遍看会不会好一点
3 回答
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问
最近在做293细胞培养,细胞老是传着传着状态就很差了,还有不明小黑点
天一湖医者
黑点可能与以下几种状况有关:1、细胞生长过老,破碎的细胞残骸;2、血清质量不好,反复冻融的成果;3、制造培育基的pH值偏高,不宜细胞生长;4、制造培育基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;5、培育原代细胞中呈现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
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