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问
PCR混检电泳阴性正常无条带,但单检电泳阴性出现和阳性相同位置的条带,向高手请教?
汤姆卜丽波
混检的时候模板量混在一起每个都不高,通过扩增,假阴性结果很容易出现的。
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问
请问左旋多聚赖氨酸包被96孔板,每孔加多少工作液合适啊
汤姆卜丽波
我们一般包被液每孔加200ul。
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问
请问半荧光定量引物怎么设计?片段大小设计多少合适?
天一湖医者
荧光定量一般限定在100-250bp间,半定量似乎没有太严格的限制,可以放宽到500-600bp吧
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问
请问在进行荧光定量时,一般qpcr片段应设计多大,一般情况下是80-180bp左右大小,但看其他文献有的设计片段大小240bp?
天一湖医者
荧光PCR主要包括两种形式一种是sybr green I技术,对片段长度没有特殊要求,一般100-400都可以,当然扩增片段越大,溶解曲线温度越高,有利于区别引物二聚体形成的溶解曲线,SYBR GREEN的特异性主要看引物;
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问
大体系PEI转染293S细胞,细胞1.5*10^6/ml,质粒与PEI比例为1:4,第二天细胞过滤下降,是什么原因呢?有做过的吗
bamboopiggy
293S细胞是被驯化成能够悬浮培养且能够耐受低钙离子培养条件的293细胞系。你可以靠过梯度做质粒与pei的浓度比例:从1:2到1:8
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问
重组质粒,阳性克隆跑出来有目的条带(图1),提质粒双酶切后只有一条带,而且和原始质粒条带所在位置差不多。
bamboopiggy
1.同时做个单酶切看看,条带位置是否高一些,2,用载体的引物做pcr,排除假阳性
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问
为什么必须将DNA切碎至少1000bp大小(大约3个核小体~400-500bp)?
天一湖医者
为确保ChIP实验有良好精度。若您的平均片段长度大于1000bp,您将会分离获得包含您目标序列的DNA,但所要研究的蛋白会离您目标序列有700个核苷酸的距离。
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问
半悬浮的杂交瘤细胞液氮罐内冻了一年后复苏起来,养两代以后细胞不贴壁了正常吗?应该怎么处理呢?
bamboopiggy
考虑一下第一株细胞是不是污染了
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问
恩诺沙星粉在多少浓度的氢氧化钠中溶解呀?
汤姆卜丽波
我们一般用0.1mol/l的氢氧化钠去溶
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问
户外核酸检测时,室外温度较高,是否需要给试剂降温存放,最长存放多长时间不会影响检测结果?
汤姆卜丽波
最好低温存放,一般24小时之内不影响检测结果
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问
链霉菌做荧光定量 PCR能不能以基因组做模板?
汤姆卜丽波
可以做模板,这个问题应该是引物特异性不高才会出现
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问
将目的基因通过BP反应构到中间载体中,菌P检测电泳条带大小正确,但是提质粒后跑电泳,质粒的条带大小不对,请问为什么啊?
汤姆卜丽波
可能菌液pcr.出现了假阳性,提质粒出来是空载体
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问
IP后实验组有和IgG相同的条带,但阴性对照没有
月下扣动板机
看不到B蛋白的Western条带 或者 条带较弱。 (因为IgG并不能特异性的与任何蛋白结合,那么IgG所带下来的蛋白都是非特异性的与IgG结合的蛋白,得到的东西就是背景。)
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问
wb 条带解读、深浅?粗细?齐不齐?
balalaLy
条带的灰度值,包括了深浅、粗细,首先要看内参齐不齐,齐的前提下再来对比各个组的目的蛋白
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问
PCR引物如何看是否容易形成引物二聚体?
月下扣动板机
1这条亮带如果在100bp一下就可以考虑是引物二聚体了,形成引物二聚体的原因很多,如引物设计的不好,在两端容易形成回文结构或是两条引物之间也可能会互补配对;退火温度没有达到最佳,实在不行就做个温度梯度吧;再就是试着改变一下循环数,也许会有帮助。
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问
荧光定量PCR的mix是否可用于数字PCR反应体系?
帝尊
不可以的,酶的参与种类不同,未必适用。
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问
大鼠术后腹部肿胀
yanlai000
麻药导致的肠麻痹,腹腔感染积液都有可能,联系腹腔穿刺看看,外用百多邦
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问
[求助]细胞焦亡WB检测焦亡相关蛋白
汤姆卜丽波
如果条件允许,推荐都做一下我们是两种都做的,确保蛋白能检测出来
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问
细胞污染
yanlai000
污染了,复苏一株新的吧,另外把CO2培养箱也消消毒吧
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问
做ChIP试验,必须做甲醛固定么?
dxyjonas
不一定,有几种其他固定剂在某些实验中效果很好,但甲醛是最常用的,因为它可以将距离较近的DNA和蛋白共价连接在一起。当然,对于一些距离较远的分子,可以使用其他固定剂,如DSG。在设计ChIP实验时,这些都是需要考虑的因素,但在大多数情况下,甲醛是固定样本的良好选择
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