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        【求助】如何判断 Stripping Buffer 的洗脱效果?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        ryq327

        之前一直用的实验室的配方如下:

        甘氨酸:0.94g

        SDS: 5g

        ddH2O: 500mL

        用盐酸将 PH 调为 2

        之前一直是室温洗 30min,效果很好,能洗干净。最近在做的时候,好几个抗体感觉洗不掉。我们怎么能在做实验之前就知道抗原抗体的结合能力大小呢?要不然每次做实验 stripping 不掉感觉很浪费时间。

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        3 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        就我的经验来看,时间越久、次数越多、温度越高,洗脱的效果就越强。你可以通过以下方法来判断效果,先试试只洗一次,如果洗不掉,可以尝试升温和延长洗膜时间。你可以看哪个抗体条带染得最深最不好洗,你就用它开刀

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        这个只能根据你做wb的经验,如果这个抗体显示弱,可以先用,然后stripping掉后,再加显色深的那个抗体

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        stripping之后不敷抗体直接加显影液看看能不能出来条带

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