实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问研磨细胞会导致蛋白质结构破坏吗？

冷泉港蛋白

研磨不会直接破坏蛋白结构。一、关于研磨步骤和裂解液1.研磨破坏的是细胞之间的黏连，将细胞分散开2.裂解液含有裂解和促融成份，裂解细胞，释放蛋白。二、了解下蛋白的结构和降解蛋白有一级结构，氨基酸共价键链接，酶和酸碱可水解；高级结构靠氢键疏水作用等作用维持，容易破坏，通常使用的是表面活性剂。三、了解下蛋白的大小枪头是毫米大小，细胞是微米级别，蛋白是纳米结构。1毫米=1000微米 1微米=100

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问培养液pH值为什么变化太快？

麻黄连翘赤小豆

接触空气太久了容易变化酸碱度，每次用完培养基记得盖，或者分装小瓶

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问细胞复苏后细胞状态不好有哪些原因？怎么解决？

麻黄连翘赤小豆

原因很多，冻存液的好坏，冻存细胞的状态，冻存的温度，复苏太慢等等首先你要按照不同细胞不同冻存条件冻存，有些冻存液需要梯度冻存，有些血清冻存会比较好。冻存尽量选增殖较快的时候消化下来冻存，冻存后不能反复冻融

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问DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些？

麻黄连翘赤小豆

磁珠法，浓盐法，CTAB法，SDS法，实验步骤网上很多，具体还需要和你实验室条件进行匹配

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问无水硫酸钠柱的使用步骤，是一次性的吗

bamboopiggy

你如果可以重新填无水硫酸钠，就不是一次性的，但是如果只脱水完了，没法重新填，拿就是一次性的

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问铁子们，这种情况是为啥啊啊？我之前有跑过这些引物没啥问题，现在真的好多问题

麻黄连翘赤小豆

有多峰，可能引物时间放久了，看右边还有好几个问题，样本或者加样都可能会有问题，再者你用的染料是否冻融多次也要考虑一下

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问如何减少杂带的产生，求解。。。

bamboopiggy

WB？封闭充分，找个好的抗体，有的没办法，抗体不好，总会有杂带。

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问荧光染色试剂培养是否能准确性高

bamboopiggy

你要用荧光染色试剂培养细胞？提高什么的准确性呢？定位的？

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问琼脂糖凝胶电泳结果求助

bamboopiggy

你是用kit提完质粒才酶切的？还是直接用菌体，粗提一下就酶切的？感觉是质粒酶切产生的杂质。

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问dapi染色时间相同，不同样本亮度不同是怎么回事

whilt-shirt

有可能是没混匀，建议重新做一下试试

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问拿什么拯救你，我的snu182🤧🤧 2000+的血清养不活？

麻黄连翘赤小豆

看密度还可以，是否需要在培养基中加入某些生长因子刺激增殖或者改用其他好一点的血清，或者把血清浓度调高，不一定10%的血清就适合这类细胞

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问有没有学检测的大佬，想问一下亚硒酸钠中硒的含量怎么测😤😤救救孩子吧

你好几和户

（1）取本品1ml，加乙醇制氢氧化钾试液2ml，煮沸，放冷，加水4ml与乙　醚10ml，振摇后，静置使分层；取乙　醚液2ml，加0.5％2，2′-联吡啶的乙醇溶液数滴与0.2％三氯化铁的乙醇溶液数滴，应显血红色。（2）取本品1ml，加乙醇6ml，摇匀，澄清后，加硫酸铜试液1ml，即生成蓝绿色结晶性沉淀。（3）在维生素E含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间

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问求助 BCA测蛋白浓度样品加多了有影响吗

whilt-shirt

这个不影响，结果是直接能用的。

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问请教造模时药物浓度和总量的问题

whilt-shirt

不推荐这样操作，这种情况肯定会影响实验结果

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问请问酶联免疫试剂盒中的标准品开封后能使用多久？

whilt-shirt

有可能是标准品变质了，建议更换标准品

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问脑HE染色组织像海绵

whilt-shirt

有可能是组织没固定好，建议重新固定组织

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问ELISA检测细胞8-OHdG

此用户已注销

小心收集上清液，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

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问细胞代谢对于识别目的基因、蛋白质和表型很重要吗？

此用户已注销

研究者控制酵母细胞中主要代谢产物的水平，并探索这种改变对基因的行为和基因表达产物的影响。结果显示，细胞代谢改变能影响大约百分之八九十的基因的行为及其产物的表达。 “细胞代谢对细胞本身起到的作用远比我们之前认为的更加重要”，马库斯博士解释说，“细胞摄取的营养物质能影响几乎所有的基因。事实上，在许多情况下，这样的影响效果非常明显。改变细胞的代谢可能会完全改变基因的表达。传统的观点认为，由基因来控制营养

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问CO-IP实验中，IGg组有条带，IP抗体是兔源的，WB抗体是鼠源的，二抗是经过预吸附处理的二抗。

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样品被蛋白酶降解，处理方法：添加蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)；所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融。抗体浓度太低，处理方法：调整IP和/或IB抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度；抗体亲合力太低，处理方法：选用适合于IP和/或IB的相应抗体；IP抗体未与agarose珠子结合，处理方法：选用适合于IP的相应珠子，正确保存防止变质或干燥；Tag未暴露在融合蛋白构象

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问急！！！求助：ELISA试剂盒测定细胞培养上清中的酪蛋白浓度，为什么含血清比无血清浓度更低？

此用户已注销

包被抗原的浓度较小，阳性血清中抗体量大于包被抗原的量而出现钩状效应（后带效应），见意将阳性血清做一下浓度曲线看一下，或者采用棋盘滴定或单项滴定重新确定包被抗原浓度

3 回答304 围观

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