做WesternBlot时，提取蛋白后冻存，条带很弱

说明你这个蛋白已经降解了，建议重新提蛋白

条带弱的原因有两个：

1.蛋白降解，细胞裂解后细胞器的蛋白酶会释放出来。每个蛋白的稳定性都不一样，即使加了蛋白酶抑制剂

2.蛋白聚集沉淀，有些蛋白反复冻融，会发生聚集，特别是疏水性强的蛋白

解决办法：

1.提取后，尽快做实验

2.加蛋白酶抑制剂，分装，-80度保存

3.避免反复冻融

最好要加蛋白酶抑制剂，不然蛋白会降解很快，如果要磷酸化蛋白的话还得加磷酸酶抑制剂

怀疑是样品问题，可能是：1，样品不能反复冻融；2，样品未加蛋白酶抑制剂。同时，建议检查WesternBlot过程，提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般加PMSF就可以了，能多加几中种蛋白酶抑制剂。