免疫荧光加完一抗之后，需要室温孵育一会吗？还是直接4℃过夜就可以了？

直接4℃过夜就行，这样效果会好一点

可以直接四度过夜，明天再拿出来敷二抗，我一般都不会等室温

如果选择孵育过夜，那就不需要室温孵育。担心的话可以第二天从4℃拿出来再室温孵育一会。

直接4摄氏度过夜就行了，效果挺好的。

可以选择室温、4℃和37℃孵育一抗。不过大多数人还是习惯于4℃放置湿盒内孵育过夜，抗原抗体缓慢结合可以避免非特异性染色。但是如果选择4℃孵育过夜，一定要先恢复至室温后再用PBS清洗一抗，如果马上清洗很容易造成脱片。