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实验问答

31,507,956 科研人在看

问IP实验中，为什么会结合出很多杂带

dxy_gwrp7ndq

可以通过更改NaCL的浓度以及去垢剂的比例，比如：针对单纯的IP或co-ip实验或者虽然是进行IP实验，但蛋白质之间的结合比较牢靠，可以考虑使用低浓度（0.2-0.5%）的SDS洗涤抗体-sepharose beads复合物，这样可以去除绝大部分非特异性相互作用。

3 回答265 围观

问玉米籽粒GUS染色，为什么阴性对照也被染成蓝色？

Eason老歌迷

很常见，某些带有GUS但无驱动GUS启动子的空载体，如pCAMBIA系列的某些载体，可能会出现以上情形。这是由于驱动选择标记基因的35S启动子的增强子可在一定程度上远程地调节GUS的表达，这在CAMBIA网站上也有提醒说明。或者，材料被某些菌污染了，菌的类GUS基因表达了，可考虑使用含有植物内含子的GUS基因载体。

1 回答1356 围观

问动物失明怎样观察？

bamboopiggy

可以通过脑电，进行观察。或者是从小鼠能看的见的方向接近小鼠，看小鼠是否有闪避。

4 回答710 围观

问为什么注射完富血小板血浆后1天小鼠死亡了

bamboopiggy

解剖看一下，肝脏等各个内脏是否有损伤。

4 回答488 围观

问IHC求助｜小鼠4T1肿瘤组织染不出CD8

麻黄连翘赤小豆

如果染不出来可能还是抗原修复的问题或者封闭的问题，组织固定时间太短也可能导致抗原分解或者弥散

2 回答975 围观

问MCF7表不表达NKG2DL呀？

bamboopiggy

The NKG2DL expression levels of seven human BC cell lines (BCap37, MDA-MB-231, Hs 578T, MCF-7, SK-BR-3, MDA-MB-468 and BT-474) ，你直接看Silencing NKG2D ligand-targeting miRNAs enhances natural killer cell

2 回答476 围观

问细胞免疫荧光实验重复问题

bamboopiggy

1.最好单独染一个孔，然后再重复两次，因为你一次做三个，可能三个都是一个样子，要错就都错了。2，对，你说的对，三次取平均3，你用pfa固定细胞，感觉是要做胞内荧光，但是不建议你保存那么长时间，还是回来再继续做吧。

4 回答2811 围观

问求助:细胞免疫化学实验抗体的问题?

bamboopiggy

一般不用enhacer，加了这个容易出假阳性

3 回答490 围观

问求助关于免疫实验抗原的问题？

此用户已注销

由于组织在甲醛或多聚甲醛在固定中，发生蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而掩盖抗原决定簇。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定簇重新暴露，提高抗原检测率，常用方法通常使用高压加热修复，使用高压加热修复对修复温度和时间的把握十分重要，温度越高修复时间越短，温度与修复时间呈负相关。修复结束后注意室温冷却，让蛋白自然复性。另外，大家尽量使用过量的抗原修复液，防止高温液体挥发干涸，对切片造成不可逆影响。

3 回答574 围观

问用流式做免疫表型分析不能立即分析，可以用甲醛固定后放冰箱过几天再染色上机吗？

Eason老歌迷

如果不能及时上机检测，可将已经染色的细胞在1-4%的多聚甲醛中4℃固定30min，清洗细胞，之后用适量的Stain Buffer重悬细胞，4℃避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测一般不应超过72h。

4 回答5462 围观

问 RIP免疫互作怎么验证

Eason老歌迷

结合的RNA序列通过microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来鉴定。

1 回答740 围观

问免疫荧光计数统计时选取的技术视野内如果不理想，可以增大视野吗

bamboopiggy

统计视野的大小要一样，但是可以挪位置，换个视野。

4 回答457 围观

问细胞免疫荧光图定量统计

Eason老歌迷

细胞免疫荧光或组织切片进行免疫荧光后，一个组织拍摄3-5个视野。统计时用的软件是可以用imagej 也可以用ipp6。

2 回答1436 围观

问Co-ip实验中为什么重链轻链对结果有影响？

bamboopiggy

因为你用的抗体可能会识别重链轻链，如果位置又和重链轻链接近的话，阴性对照也会出现条带。

3 回答1496 围观

问请问从人源PBMC中分选的T细胞亚群是需要现用现取吗？可否冻存或是否有稳定的细胞系呢？

此用户已注销

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物，然后用CD4+T细胞的单抗,免疫磁珠法分离；或者利用流式细胞仪进行分选。如果精确的话得用专门仪器了，要后续培养干扰小建议磁珠分，这个操作比较简单，对设备要求不高，如果是要纯度高推荐流式细胞术了，这个需要有分选的仪器，一般分析仪器只能分析比例。

3 回答1168 围观

问PE抗体无法标记，而FITC抗体的结果却很好，是什么原因?

bamboopiggy

说明是PE抗体有问题了，建议换抗体。

3 回答554 围观

问为什么nlrp3做出来有很多杂带？

你好几和户

膜可以切大点，还有转膜可能没转上，找下相关文献考虑调整下转膜条件。

4 回答423 围观

问DAB显色有很多渣渣漂浮物

天一湖医者

两种可能，谨供参考：1.DAB沉渣。建议将DAB过滤后使用。2.载玻片制作工艺有问题：查一下是不是每张片子都这样，如果是其中机张的话，就是载玻片的质量问题。在Paint玻片时，油漆飞溅造成的。建议换质量好一点的。也可以在切片前，在10倍镜下检查一下玻片，把不合格的挑出来。

4 回答722 围观

问诱导性多能干细胞（IPSC）培养问题

Eason老歌迷

这就是诱导的问题，细胞发生死亡了。可以看看这篇文章“iPS细胞诱导中会出现细胞克隆”，讲的很详细。

2 回答1210 围观

问肠道干细胞olfm4免疫组化染色一抗用的CST的olfm4，浓度为1：500。 DAB显色时间1分半。

Eason老歌迷

你这个图显色很清晰，很明显，谢谢你分享染色方法。

2 回答881 围观

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