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        为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?或者提出了很多杂蛋白

        相关实验: GST pull-down 分析

        user-title

        goonQ2HM

        原核细胞bl.21表达一个3400bp左右基因,融合表达GST标签,测序载体没有问题,但是提蛋白一直没有目的条带,诱导剂浓度以及诱导时间,温度都调试过,还是表达不出目的蛋白,是因为分子量太大了吗?

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        4 个回答

        user-title

        冷泉港蛋白

        有帮助

        分子量太大了,表达不出来;也有可能同时有细胞毒性。

        1.你的重组蛋白分子量=27KD+130KD=157KD

        2.原核蛋白表达的分子量大小一般不能超过100KD(含标签);如果不表达,诱导剂浓度,温度,时间的调整方面,意义不大,不会实现从无到有的质变,只是个量变而已。

        3.如何解决:

        A.大蛋白很少使用大标签,

        B.截断表达

        C.更换为真核表达系统

        D.做实验之前先预研一下:文献和商业化蛋白的厂家,做个参考。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        可能是被酶降解,可能是没有保持低温操作,样品保存不当,样品放置时间过长。

        user-title

        府宅

        有帮助

        1 你的细胞中不表达这种蛋白质,换一种细胞;2 你的细胞中的蛋白质被降解掉了,你必需加入PMST,抑制蛋白酶活性;3 你的抗体不能识别目标蛋白,多看看说明,看是否有问题。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        载体没问题,那目的基因有没有插入进去呢?有可能是自连的空载呢。

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