前后引物同时加入为什么会P出两条带

碱基配对不是绝对正确，会有错配的，结合在不同地方，扩增出不同的条带

有可能是引物不匹配或者程序有问题

可以适当提高退火温度，降低引物浓度，P出两条带是引物特异性差。

两条带，首先引物的问题比较大。设计引物的时候是否是按照跨内含子进行设计的，这样设计的引物一般不会从基因组中P出条带。再就是提取RNA的时候保证纯度，不要有基因组污染。引物温度的问题可以通过做一个梯度温度PCR进行解决，筛选出最佳的温度。如果是前两个问题，那么引物需要重新设计，再就是提取RNA时需要小心一些。

引物特异性差。 可以利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物

引物用量偏大，引物的特异性不高。 应调换引物或降低引物的使用量