实验问答21,908,062 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问如何取微小组织进行WB？

Amor良

可以选择0.2μml的膜，同时缩短转移时间。

6 回答623 围观

问Western Blot杂带太多的原因是

今天摆烂了咩

杂带多的原因——上样量过高，蛋白样本降解，蛋白本身有多个修饰位点，抗体未纯化，一抗浓度过高，洗涤不完全，封闭不好等都可能导致杂带产生。

6 回答2482 围观

问跑带，条带上有圆形的白孔?

岳努力岳幸运

感觉像是湿转的wb。最可能的原因是在转膜操作的时候，SDS-PAGE胶和pvdf或者nc膜中间有小气泡。在电转液中将夹板里的海绵和滤纸都充分浸湿，而且电转液的量应该足够淹没膜，把胶放在膜上的时候沿着一边放下去，可以轻轻刮排气泡。最后把滤纸海绵都盖好后，为了万无一失，最好用圆管在上面滚一滚充分排出小气泡！

5 回答232 围观

问如何提高蛋白质提纯效率？

whilt-shirt

采用进口的专用试剂盒会提高提纯率

5 回答1259 围观

问薄层色谱法点样应该注意些什么？

举个栗子ok

样品溶液浓度不能太稀，同一板样点间距离合适。

4 回答1888 围观

问为什么转膜之后用TBST越洗越淡？

桐轩456

我觉得你如果用TBST洗5miundefined3次，封闭敷抗体，密闭室温改为2小时去试试。

5 回答1612 围观

问做WB提取膜蛋白时有什么注意事项？

dxy_gwrp7ndq

电转印膜的选择：有NC膜、重氮化膜和阳离子尼龙膜，PVDF膜。其中NC膜使用的最为普遍，它的蛋白质容量大，可用各种染色方法进行检测，但是它与蛋白质的结合是非价性的，膜干燥后很脆。此外膜的孔径大小也是考虑的重要因素，目的蛋白30KD以下用0.22 um孔径的NC膜，30KD以上用0.45 um孔径的NC膜；转印选择恒流，每个转印槽150 mA，10KD以下转印40min，10-30KD转印50min

3 回答1127 围观

问蛋白质粉的定量测定实验步骤

wuli猫宁

蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一目前常用的有两种古老的经典方法，即酚试剂法和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法。其中酚试剂法和考马斯亮蓝法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍。。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花

3 回答629 围观

问请教各位大神，WB条带过浅有什么补救的办法吗，后期可以调得清楚些吗😭😭

府宅

1：你的蛋白的量的多少，要保证一定的蛋白总量2：转膜的参数设置：100mA,4小时，冰浴3：背景太深，是不是你的二抗浓度太高以及洗膜的时间不够，15分钟/次，共1小时

3 回答516 围观

问跑WB被上样的针尖戳了，其上的肿瘤蛋白会对人造成危险吗

bqejjh123

一年前的时候跟同学做他的小鼠荷瘤实验，操作中老鼠没拿稳同学慌了自己扎了一下左手鱼际，就是用注射腹水瘤的针头，当时大家都很紧张，讨论这个问题会不会把肿瘤移植的自己身上来。肿瘤移植我做过不少，昆明小鼠和裸鼠都接种过，一般来说成瘤率100%，个别没有成瘤的怀疑是操作有误。但从来没有人在自己身上做这个实验，也没试过是否那样的针头（注射过或者抽吸有细胞悬液的针头）扎一下自己后果怎样。从理论上来讲（肿瘤的血道

3 回答422 围观

问为什么Wb 转膜会出现白板？

府宅

排除蛋白问题，抗体问题，再出现大白板很有可能就是转膜的问题了，试试改变一下转膜条件，转膜完成以后用丽春红染个膜大概看看转膜效果

4 回答724 围观

问用的为特异性一抗，但是对照样品却跑出来相应位置的条带，是什么原因?

whilt-shirt

有可能是样本污染了，也有可能是抗体浓度过高

4 回答272 围观

问细胞膜的两种提取方法？

bamboopiggy

1.对于水溶性的细胞膜蛋白，可以采用反复冻融的方法，但是对于疏水蛋白就需要用到去垢剂，所以如果方便最好还是用低渗的方法提取，因为里面直接加了去垢剂。2.细胞破碎仪是会产热，但是你可以将你样本管放在冰水浴中，然后再用破碎仪震破细胞，这样基本不会影响蛋白。以上两种意见如果不放心，最好先做一个预实验，试一下，那种方式对你来说合适。

3 回答9373 围观

问E.coli表达His-tag蛋白有哪些操作注意事项？

岳努力岳幸运

1.蛋白纯化的条件：首先，看一看这个蛋白在文献中有没有纯化过，可以参考。如果从来没有人纯化过，除了提到的诱导剂浓度，温度和时间，其实裂解蛋白的buffer更重要一些，根据蛋白的等电点看一看酸碱，根据蛋白是否容易沉淀看盐浓度，根据蛋白是否稳定看蛋白酶抑制剂和还原剂…除了buffer还有wash buffer和elute buffer中咪唑浓度也挺重要的。2.如何看蛋白分子量：把测序结果从起始到终止的

3 回答861 围观

问单个目的蛋白抗体显影后出现两个条带一般是什么问题？

dxy_gwrp7ndq

1.非特异性的分子量偏大条带之一可能是目的蛋白在SDS PAGE出的问题出了问题，另外两个带可能本来就是杂带了。可以回收后对条带用质谱检测精确的分子量加以确定。2.非特异性的分子量偏大条带至少应该有杂带，杂带出现而且与一抗相互作用，那么只能说杂带的顺序表位也能被一抗识别，必须更换专一性更高的抗体。3.还有考虑你的镍柱亲和分离的问题，是不是获得了你的需要的目的蛋白质。

3 回答3093 围观

问WB条带灰度如何分析，数据如何处理？

府宅

比较简单的综合性质图像处理软件ImageJ可以很方便的进行灰度分析，而且ImageJ是免费软件，可以在其官网直接下载使用。

3 回答933 围观

问蛋白质定量实验原理？

君君子丶

BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在丐界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改迚而成。二价铜离子在碱性的条件下、可以被蛋白质还原成一价铜离子。biuret reaction。、一价铜离子和独特的BCA Solution A、含有BCA，相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子。形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸

3 回答472 围观

问玻片制备如何提高准确率

bqejjh123

注意仪器校正，具有准确体积的和质量的仪器，如滴定管、移液管、容量瓶和分析天平砝码，都应进行校正，以消除仪器不准所引起的系统误差。

2 回答329 围观

问如何保证GFP嵌合体监控蛋白质和蛋白质相互实验完整进行

dxywode

可以选用非变性聚丙稀醜胺凝胶试剂

2 回答329 围观

问所用缓冲液的体积由哪些方面而定？

丁香粉猪猪

只要知道缓冲对的PH值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按公式计算盐和酸的量。总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量

3 回答318 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序