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薄层色谱法点样应该注意些什么?
举个栗子ok
样品溶液浓度不能太稀,同一板样点间距离合适。
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问
为什么转膜之后用TBST越洗越淡?
桐轩456
我觉得你如果用TBST洗5miundefined3次,封闭敷抗体,密闭室温改为2小时去试试。
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问
做WB提取膜蛋白时有什么注意事项?
dxy_gwrp7ndq
电转印膜的选择:有NC膜、重氮化膜和阳离子尼龙膜,PVDF膜。其中NC膜使用的最为普遍,它的蛋白质容量大,可用各种染色方法进行检测,但是它与蛋白质的结合是非价性的,膜干燥后很脆。此外膜的孔径大小也是考虑的重要因素,目的蛋白30KD以下用0.22 um孔径的NC膜,30KD以上用0.45 um孔径的NC膜;转印选择恒流,每个转印槽150 mA,10KD以下转印40min,10-30KD转印50min
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问
蛋白质粉的定量测定实验步骤
wuli猫宁
蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一目前常用的有两种古老的经典方法,即酚试剂法和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法。其中酚试剂法和考马斯亮蓝法灵敏度最高,比紫外吸收法灵敏10~20倍。。每种测定法都不是完美无缺的,都有其优缺点。在选择方法时应考虑:①实验对测定所要求的灵敏度和精确度;②蛋白质的性质;③溶液中存在的干扰物质;④测定所要花
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问
请教各位大神,WB条带过浅有什么补救的办法吗,后期可以调得清楚些吗😭😭
府宅
1:你的蛋白的量的多少,要保证一定的蛋白总量2:转膜的参数设置:100mA,4小时,冰浴3:背景太深,是不是你的二抗浓度太高以及洗膜的时间不够,15分钟/次, 共1小时
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问
跑WB被上样的针尖戳了,其上的肿瘤蛋白会对人造成危险吗
bqejjh123
一年前的时候跟同学做他的小鼠荷瘤实验,操作中老鼠没拿稳同学慌了自己扎了一下左手鱼际,就是用注射腹水瘤的针头,当时大家都很紧张,讨论这个问题会不会把肿瘤移植的自己身上来。肿瘤移植我做过不少,昆明小鼠和裸鼠都接种过,一般来说成瘤率100%,个别没有成瘤的怀疑是操作有误。但从来没有人在自己身上做这个实验,也没试过是否那样的针头(注射过或者抽吸有细胞悬液的针头)扎一下自己后果怎样。从理论上来讲(肿瘤的血道
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问
为什么Wb 转膜会出现白板?
府宅
排除蛋白问题,抗体问题,再出现大白板很有可能就是转膜的问题了,试试改变一下转膜条件,转膜完成以后用丽春红染个膜大概看看转膜效果
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问
用的为特异性一抗,但是对照样品却跑出来相应位置的条带,是什么原因?
whilt-shirt
有可能是样本污染了,也有可能是抗体浓度过高
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问
细胞膜的两种提取方法?
bamboopiggy
1.对于水溶性的细胞膜蛋白,可以采用反复冻融的方法,但是对于疏水蛋白就需要用到去垢剂,所以如果方便最好还是用低渗的方法提取,因为里面直接加了去垢剂。2.细胞破碎仪是会产热,但是你可以将你样本管放在冰水浴中,然后再用破碎仪震破细胞,这样基本不会影响蛋白。以上两种意见如果不放心,最好先做一个预实验,试一下,那种方式对你来说合适。
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问
E.coli表达His-tag蛋白有哪些操作注意事项?
岳努力岳幸运
1.蛋白纯化的条件:首先,看一看这个蛋白在文献中有没有纯化过,可以参考。如果从来没有人纯化过,除了提到的诱导剂浓度,温度和时间,其实裂解蛋白的buffer更重要一些,根据蛋白的等电点看一看酸碱,根据蛋白是否容易沉淀看盐浓度,根据蛋白是否稳定看蛋白酶抑制剂和还原剂…除了buffer还有wash buffer和elute buffer中咪唑浓度也挺重要的。2.如何看蛋白分子量:把测序结果从起始到终止的
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问
单个目的蛋白抗体显影后出现两个条带一般是什么问题?
dxy_gwrp7ndq
1.非特异性的分子量偏大条带之一可能是目的蛋白在SDS PAGE出的问题出了问题,另外两个带可能本来就是杂带了。可以回收后对条带用质谱检测精确的分子量加以确定。2.非特异性的分子量偏大条带至少应该有杂带,杂带出现而且与一抗相互作用,那么只能说杂带的顺序表位也能被一抗识别,必须更换专一性更高的抗体。3.还有考虑你的镍柱亲和分离的问题,是不是获得了你的需要的目的蛋白质。
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问
WB条带灰度如何分析,数据如何处理?
府宅
比较简单的综合性质图像处理软件ImageJ可以很方便的进行灰度分析,而且ImageJ是免费软件,可以在其官网直接下载使用。
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问
蛋白质定量实验原理?
君君子丶
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在丐界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改迚而成。二价铜离子在碱性的条件下、可以被蛋白质还原成一价铜离子。biuret reaction。 、一价铜离子和独特的BCA Solution A、含有BCA,相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子。形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸
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问
玻片制备如何提高准确率
bqejjh123
注意仪器校正,具有准确体积的和质量的仪器,如滴定管、移液管、容量瓶和分析天平砝码,都应进行校正,以消除仪器不准所引起的系统误差。
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问
如何保证GFP嵌合体监控蛋白质和蛋白质相互实验完整进行
dxywode
可以选用非变性聚丙稀醜胺凝胶试剂
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问
所用缓冲液的体积由哪些方面而定?
丁香粉猪猪
只要知道缓冲对的PH值,和要配制的缓冲液的pH值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算盐和酸的量。总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系并列出了表格。只要知道要配制的缓冲液的pH,经查表便可计算出所用缓冲剂的比例和用量
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问
Wb实验中二抗的作用?
府宅
二抗用于检测细胞或组织样本中的蛋白表达。它与抗原特异性一抗结合,二抗可检测目标蛋白中的高度特异性氨基酸序列。二抗对一抗的指定区域或区域的特异性允许多个二抗与单一一抗结合,放大信号并增加检测敏感性。二抗保存的好可用2-3次。
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问
超声粉碎细胞时需不需要冰上操作,怎么样才能不让温度升得太高?
whilt-shirt
正常来说是需要的,但是不太好操作,一般都是超声5-10s放冰上,然后再超声
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问
跑磷酸化蛋白是不是不能用奶粉封闭啊?什么替代最好?
YLO6WJ
可以用脱脂奶粉封闭,5%BSA也可以
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问
提出来的蛋白样品最多能保存多长时间呢?在什么条件下保存最好?
毛桃子啊
确定每个样品的浓度之后,可将其冻存于 -20 ℃ 或 -80 ℃(一年) 以备后续使用。建议分装保存,避免反复冻融。
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