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        如何提高蛋白质提纯效率?

        相关实验:蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

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        2010010679

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        5 个回答

        user-title

        whilt-shirt

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        采用进口的专用试剂盒会提高提纯率

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        bamboopiggy

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        细胞培养状态要好,用lysis溶解细胞细胞全程要在冰上操作,可以适当延长溶解时间。

        user-title

        府宅

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        提高蛋白提纯效率的方法:

        1、电泳

        不仅是分离蛋白质混合物和鉴定蛋白质纯度的重要手段,而且也是研究蛋白质性质很有用的方法。等电聚焦分辨率很高,pI有0.02pH的差异就能分开。2D-PAGE分离蛋白质分辨率已经发展到100000个蛋白点。

        2、离子交换层析

        改变蛋白质混合物溶液中的盐离子强度、pH和(阴、阳)离子交换填料,不同蛋白质对不同的离子交换填料的吸附容量不同,蛋白质因吸附容量不同或不被吸附而分离。

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        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        可以用以下方法提高效率:

        1、透析和超滤

        透析在纯化中极为常用,可去除盐类(脱盐及置换缓冲液)、有机溶剂、低分子量抑制剂等。超滤一般用于浓缩和脱色。

        2、离心分离置换缓冲液

        许多酶富集于某一细胞器内,匀浆后离心得到某一亚细胞成分,使酶富集10-20倍,再对特定的酶进行纯化。 差速离心,分辨率较低,仅适用于粗提或浓缩。速率区带法,如离心时间太长所有的物质都会沉淀下来,故需选择最佳分离时间,可得到相当纯的亚细胞成分用于进一步纯化,避免了差速离心中大小组分一起沉淀的问题,但容量较小,只能用于少量制备。等密度梯度离心常用的介质有蔗糖、聚蔗糖、氯化铯、溴化钾、碘化钠等。

        3、凝胶过滤

        这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一,注意使要分离的蛋白质分子量落在凝胶的工作范围内。选择不同的分子量凝胶可用于脱盐、置换缓冲液及利用分子量的差异除去热源。

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        bqejjh123

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        样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

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