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科研学霸天团，48小时有问必答

问试剂盒提取RNA，中间可以暂停嘛，储存条件是什么，能暂停多久？

sswei

如果只是短期储存，重悬的RNA应放置于-20°C；如果是长期储存的话，就应该放置于-80°C。储存RNA时，可以加入少量的RNA酶抑制剂（RP5601），避免RNA的降解，RNA可以直接做下游实验。如果要长期保存RNA，可以加入RNAlong。

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问microRNA 实时定量pcr标准曲线相关问题

z流沙z

原液浓度高，ct值小，这是正确的，稀释后ct值变大才符合

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问旋毛虫干预下细菌性肠炎小鼠的症状及肠道菌群丰度变化的实验设计该怎么设计？

是TTT

做qPCR，可以定量对比玄毛虫干预和不干预，小鼠肠道菌群丰度的差异炎症因子的话，也可以用qp去做，可以提取小鼠肠道组织RNA，当然也可以用elisa试剂盒检测

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问设计引物时需要清楚哪里是内含子和外显子吗？

loveliufudan

如果引物的序列恰好在内含子中，可能会导致PCR扩增失败或者扩增出错误的产物。在设计引物时，应该尽量避免选择内含子区域作为引物的靶标，以减少这种情况的发生。在设计引物时，可以考虑使用已知的外显子序列来设计引物，或者使用计算机软件对基因组进行分析，筛选出不包含内含子的序列作为引物靶标。此外，还可以利用特殊的引物设计技术，如外显子特异性引物设计技术（Exon-primed intron-crossing

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问pcr，目的条带4300左右，请问如何调整

loveliufudan

下面是一些可能的解决方案：增加引物浓度：你可以尝试增加引物的浓度，以增加扩增反应的效率。但是要注意，如果引物浓度过高，可能会导致非特异性扩增，产生不必要的杂带。优化退火温度：你可以优化PCR退火温度，使其适合引物的结合温度。可以尝试降低退火温度，以便引物更容易与模板DNA结合；或者尝试增加退火温度，以增加扩增特异性。优化PCR循环数：你可以优化PCR循环数，以便在扩增反应期间充分放大目标DNA。但

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问有谁知道哪个老师或者实验室有做LncRNA PCR 实验？

土井挞克树

这个可以问一下大学附属的实验室，一般都可以做。

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问第一次要自己设计实验想请问有没有人做过金纳米颗粒 PCR ？是否有详细的步骤能参考？

loveliufudan

金纳米颗粒PCR（Gold Nanoparticle PCR）是一种利用金纳米颗粒作为PCR信号放大的探针，其灵敏度高于传统PCR。下面是一些步骤和建议，供您参考：1.准备PCR反应体系：根据实验需要，制备PCR反应体系，通常包括PCR引物、dNTP、Taq聚合酶、MgCl2和PCR缓冲液等。可根据实验需要，将金纳米颗粒直接加入PCR反应体系中，或使用金纳米颗粒探针。2.制备金纳米颗粒探针：金纳米

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问构建基因修饰小鼠的话，如何确定不同种属间的同源位点选择。

sswei

使用R包homologene来查找不同种属间的同源位点选择。

3 回答481 围观

问定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影

loveliufudan

定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影可能会影响结果的准确性，建议排除掉拖影问题后再进行数据分析。拖影一般是由于PCR反应过程中，引物结合到非特异性模板上扩增所导致的。这种非特异性扩增可能是由于PCR反应条件不恰当或引物设计不合理所导致的。以下是一些可能导致PCR反应中出现拖影的原因和解决方法：PCR反应条件不恰当：PCR反应温度过低或时间过长，会导致扩增产物不特异性地结合到非特定的模板上，从而导致

3 回答408 围观

问荧光定量的曲线是这样的，是不是证明这个引物不特异呀

loveliufudan

可能是引物不特异，但也有其他可能的原因。以下是一些可能导致PCR曲线出现此类现象的原因：引物设计不合理：引物设计可能存在一些问题，如引物长度、序列不合适等，会导致引物与非特定模板结合并扩增，从而导致此结果。模板DNA存在杂质：模板DNA存在杂质可能会导致PCR反应出现此类现象。例如，存在其他DNA片段或残留的基因组DNA片段可能会被引物扩增，从而产生这种结果。反应条件不合适：PCR反应的温度、时间

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问qpcr结果可以绘制ROC曲线吗

dxyc42u

单纯的只有qpcr曲线无法做ROC曲线

4 回答713 围观

问小鼠骨骼pcr与正常组织pcr的实验步骤的异同之处及注意事项?

z流沙z

主要就是研磨，其他和正常组织提取RNA一样

3 回答899 围观

问补实验的时候，以及想把同一材料的多个基因的表达放一张图，以看出来趋势的时候，如何进行板间校正？

土井挞克树

可以用image做板间校正，把所有结果放在一张图上

3 回答1050 围观

问如果RNA提取浓度太低（甚至达不到逆转要求的量）的情况下，定量是不是只能靠cDNA浓度？

土井挞克树

如果rna浓度太低，可以靠cdna进行定量，但如果二者浓度差异太大，结果误差也会增高。

4 回答1590 围观

问同一个样本做同一个基因，做了两个复孔，但是一个孔溶解曲线的温度是81.5，另外一个孔是81度，这是为什么呢？（溶解曲线都是单峰）

土井挞克树

设置的问题，溶解会有不同的温度设置，温度设置差异结果就会有差异，但是相差0.5是可以接受的

3 回答736 围观

问qPCR每次做结果都不一样，大多时候各组没有差异，怀疑QPCR不准

土井挞克树

先检查体系是否有降解，每次都不一致的话最可能的就是体系存在降解问题。

4 回答1591 围观

问加完样本不立即上机，冻-20℃过夜可以吗？

土井挞克树

过夜的话样品很容易降解，建议尽快上机

4 回答1228 围观

问用质粒做qPCR的时候，低浓度的不同稀释倍数质粒（1undefined4-1undefined1copies/ul）CT值结果很接近，是质粒稀释的问题吗？要

土井挞克树

考虑质粒本身浓度太低，所以稀释后ct值拉不开，很接近。

4 回答1455 围观

问内参相差1个ct值的结果可以用吗？内参相差多少的结果可以用？如果内参差别比较大样品要如何处理呢？

土井挞克树

差一个ct值是可以用的，如果差的大就需要重新稀释cdna

4 回答3289 围观

问外周血PBMC提取RNA的技巧(怎么保证提取过程中RNA不被降解)

土井挞克树

减少污染和高温，可以加入稳定剂。

4 回答2213 围观

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