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        同一个样本做同一个基因,做了两个复孔,但是一个孔溶解曲线的温度是81.5,另外一个孔是81度,这是为什么呢?(溶解曲线都是单峰)

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        实验室小助理夏奇

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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        设置的问题,溶解会有不同的温度设置,温度设置差异结果就会有差异,但是相差0.5是可以接受的

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能的原因包括:

        不同位置的反应条件略有不同。即使在同一实验板中,不同的复孔之间也可能存在微小的反应条件差异,例如微小的温度差异或反应液体积的微小差异,这可能会影响PCR产物的熔解行为。

        技术上的误差。在PCR过程中,一些技术上的误差可能会导致产物的熔解行为稍有不同,例如反应液体积、反应时间或温度梯度等的微小变化,这些变化可能会导致溶解曲线温度略微不同。

        在你的实验中,由于两个复孔的溶解曲线都是单峰,因此可以认为两个复孔的PCR产物是类似的,可以将它们视为同一基因的表达值。不过,为了更加准确地比较基因的表达量,可以在每个复孔中进行多次PCR反应,并计算每个复孔中的平均溶解曲线温度,以减少技术误差对结果的影响。

        user-title

        伯乐生命医学产品

        有帮助

        由于溶解曲线分析一般设置0.5度温度间隔采集荧光信号,因此溶解峰相差0.5度应该是同样的扩增产物,没问题。

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