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        定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

        user-title

        dxy_7d4tlk84

        出现1、2这样的拖影可以用吗?是什么原因出现拖影呢,急需帮助。图片描述

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影可能会影响结果的准确性,建议排除掉拖影问题后再进行数据分析。拖影一般是由于PCR反应过程中,引物结合到非特异性模板上扩增所导致的。这种非特异性扩增可能是由于PCR反应条件不恰当或引物设计不合理所导致的。

        以下是一些可能导致PCR反应中出现拖影的原因和解决方法:

        PCR反应条件不恰当:PCR反应温度过低或时间过长,会导致扩增产物不特异性地结合到非特定的模板上,从而导致拖影。建议检查PCR反应体系的温度和时间,尝试调整PCR反应条件。

        引物设计不合理:引物的设计可能存在一些问题,如引物过于简短、非特异性、重叠等,会导致引物结合到非特定的模板上扩增。建议重新设计引物,保证其特异性和可靠性。

        PCR反应过程中污染:PCR反应体系中可能存在细菌、真菌、DNA片段或其他污染物,这些污染物可能与引物或PCR产物结合并扩增。建议加强实验室清洁措施,避免污染,并使用高质量的PCR试剂。

        模板DNA浓度过高:如果模板DNA浓度过高,PCR反应中可能出现非特异性扩增,导致拖影。建议优化模板DNA浓度,避免过高或过低。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        不建议使用了,一般拖尾代表已有降解

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        脱尾可能是体系中存在降解导致的,去除降解因素。

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