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        第一次要自己设计实验 想请问有没有人做过金纳米颗粒 PCR ?是否有详细的步骤能参考?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

        user-title

        dxy_kl5kohgr

        目前做的题目是用食物微生物来探讨金纳米颗粒PCR 和传统 PCR 的差别像是灵敏度。


        详细问题包括

        1. 能直接金纳米颗粒加到 PCR产物吗还是需要用探针

        2.最后用电泳来看结果还是比色分析法


        第一次自己从头到尾设计实验真的好难。看了很多文献但是都没有找出一个仔细的 protocol 想问看看有没有什么建议。谢谢!

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        金纳米颗粒PCR(Gold Nanoparticle PCR)是一种利用金纳米颗粒作为PCR信号放大的探针,其灵敏度高于传统PCR。下面是一些步骤和建议,供您参考:

        1.准备PCR反应体系:根据实验需要,制备PCR反应体系,通常包括PCR引物、dNTP、Taq聚合酶、MgCl2和PCR缓冲液等。可根据实验需要,将金纳米颗粒直接加入PCR反应体系中,或使用金纳米颗粒探针。

        2.制备金纳米颗粒探针:金纳米颗粒探针是将PCR引物与金纳米颗粒表面修饰的探针结合,以增加PCR信号的灵敏度。可以自行合成或购买商用金纳米颗粒探针。

        3.进行PCR反应:将PCR反应体系进行热循环PCR,反应程序可根据实验需要进行优化。金纳米颗粒PCR通常需要进行额外的热处理步骤,以使金纳米颗粒探针与PCR产物结合。

        4.检测PCR产物:金纳米颗粒PCR产物可以使用电泳、比色法等方法进行检测。其中,电泳可以检测PCR产物的大小和数量,比色法可以通过金纳米颗粒表面等离子体共振(SPR)效应检测PCR产物。

        需要注意的是,金纳米颗粒PCR对反应条件的要求较高,如金纳米颗粒探针浓度、反应时间等,需要进行优化和控制。同时,金纳米颗粒探针可能会影响PCR反应的特异性和准确性,因此需要进行对照实验,以验证实验结果的可靠性。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        分别pcr之后进行电泳,比较条带粗细。或者设计qpcr探针引物,进行qpcr后,比较ct值

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        一般金纳米颗粒加到 PCR产物是需要用探针的,后期可以用电泳看结果

        user-title

        dxy_kl5kohgruser-title

        谢谢!想请问是否是将金纳米颗粒探针直接加入 PCR 反应体系进行 PCR,那加的量一般来说是多少?如果 DNA template 是 2ul 的话。

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