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        pcr,目的条带4300左右,请问如何调整

        相关实验:重叠延伸 PCR

        user-title

        dxy_ff8vyjrw

        请问,最下面那个带是引物二聚体吗?引物结合力不好?目的片段是4300,太淡了。或许还有什么其他的办法啊。目前有试过提高退火温度,甚至提高到72度,也试过加入DMSO,换过酶,都没有带。图片描述

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        下面是一些可能的解决方案:

        增加引物浓度:你可以尝试增加引物的浓度,以增加扩增反应的效率。但是要注意,如果引物浓度过高,可能会导致非特异性扩增,产生不必要的杂带。

        优化退火温度:你可以优化PCR退火温度,使其适合引物的结合温度。可以尝试降低退火温度,以便引物更容易与模板DNA结合;或者尝试增加退火温度,以增加扩增特异性。

        优化PCR循环数:你可以优化PCR循环数,以便在扩增反应期间充分放大目标DNA。但是要注意,循环数过多可能会导致非特异性扩增。

        尝试添加聚丙烯酰胺(PVP):PVP可以降低PCR中引物之间的竞争,并提高PCR反应的特异性和产物的清晰度。可以尝试在PCR反应中添加一些PVP,以提高PCR反应的效率和产物的清晰度。

        尝试使用热启动酶:热启动酶(如Platinum Taq DNA聚合酶)可以在PCR反应开始前使酶处于非活性状态,并且只在高温条件下激活酶活性,从而降低非特异性扩增的可能性,并提高PCR反应的效率和产物的清晰度。

        尝试优化模板DNA浓度:你可以尝试优化模板DNA的浓度,以便在扩增反应期间充分放大目标DNA。但是要注意,模板DNA浓度过高可能会导致非特异性扩增。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        最前面的是引物二聚体,4300可能有点偏大了,不是很好pcr,可以增加模板量试一下

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        看着像是多聚物,可以添加解构酶解构开。

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