实验问答21,876,231 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问有没有哪位知道做qpcr的时候，熔解曲线会是这样的原因啊，前面8个样品都异常，第九个样品又正常了？

来一起探讨

可能是引物的浓度太高，或是设计的引物存在二聚体，或引物特异性差

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问为什么微流控芯片在做PCR实验室会出现阳性液滴分布不均匀的情况？如果是芯片对核酸分子的吸附作用，有什么试剂能减少吸附作用

loveliufudan

微流控芯片PCR实验出现阳性液滴分布不均匀的原因可能有:1. 芯片材料对核酸的吸附作用。一些材料表面带正电荷,会吸附带负电荷的DNA,导致液滴内核酸分布不均。2. 核酸的表面活性剂吸附在微孔壁。造成核酸分子无法均匀释放入液滴。3. 芯片表面处理不当,存在吸附核酸的部位。4. 核酸样本制备不完全,存在聚集。对策:1. 选用耐酸、抗吸附材料,如硅硝胶芯片。2. 在PCR反应前,用BSA或Tween 2

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问怎么设计重叠延伸PCR(点突变）的引物？

sswei

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问请问摇菌后pcr基因鉴定，出现的条带比目的条带短，并且不止一次是怎么回事？

loveliufudan

可能有几个原因： 1. 引物设计问题：检查所使用的引物序列是否正确，并确保引物序列与目标基因序列匹配。如果引物序列存在错误或与目标序列不匹配，可能会导致扩增产物大小不符合预期。 2. PCR条件优化：优化PCR反应条件，包括温度梯度、延伸时间和循环数等，可以尝试不同的温度梯度或延伸时间来优化PCR反应，以获得更准确的扩增产物大小。 3. DNA模板质量和浓度：确保所使用的DNA模板质量良好，并且在

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问两种细胞样品同一基因qPCR溶解曲线的Tm值不一致，可以进行两组定量分析吗？

晓雨知春来

建议选择具有较为稳定的Tm值的引物。

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问PCR扩增，长度符合预期，但是测序回来的序列经对比后，不符合要求。

loveliufudan

出现目的片段与预期不符的情况可能有以下几个可能原因： 1. 污染或混合：在连接载体和转化涂板的过程中，可能存在外源性DNA的污染或混合，导致测序结果显示的不是您所期望的目的片段。这可能是由于工作台、试剂、PCR管或其他实验室环境中存在其他DNA片段的污染所致。为了避免这种情况，建议在实验室操作中严格控制污染，注意无菌操作，并避免试剂和操作工具的交叉污染。 2. 扩增过程中的错误：在PCR扩增目的片

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问想要做逆转录和qpcr但存在基因组DNA污染，请问有没有什么方法能最大限度的保留rna样品，并去除DNA的污染？

loveliufudan

要最大限度地保留RNA样品并去除DNA污染，可以尝试以下方法： 1. DNase消化：使用DNase酶对样品进行消化，以降解其中的DNA。这样可以有效地去除DNA污染，但需要小心控制反应条件和时间，以确保RNA不受到降解。 2. DNase处理后的RNA再逆转录：在DNase消化后，使用逆转录酶将RNA转录成cDNA。由于DNase只能降解DNA而不影响RNA的逆转录，这将帮助你获取只包含RNA的

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问数字pcr微滴生成求助🆘🆘🆘

晓雨知春来

应该是受到液体性质和浓度的影响，液体的性质和浓度可以影响微滴生成的结果。液体的表面张力、粘度和流动性都会影响微滴的形成和稳定性。确保使用合适的液体配方和浓度，避免过高或过低的浓度对微滴生成的影响。

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问重复序列很多的PCR

晓雨知春来

重复序列很多的PCR，可以利用高速离心法来纠正。

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问pcr扩增产物出现杂带怎么办？

土井挞克树

引物设计不合理　　引物是PCR扩增反应中的重要组成部分，引物的选择和设计对PCR扩增的特异性和准确性有很大的影响。如果引物的设计不合理，可能会导致扩增产物出现杂带。例如，引物长度过短、引物的序列重复、引物的序列含有多个GC或AT碱基等都可能导致PCR扩增产物出现杂带。　　解决方法：重新设计引物，确保引物的长度适当、序列不重复、GC含量和AT含量适中，并使用专业的引物设计软件进行设计。　　模板DNA

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问玻璃毛细管芯片的微流控液滴不稳定

loveliufudan

要改善液滴的稳定性，您可以考虑以下几点： 1. 优化针尖的制备：尽可能使针尖表面更加平滑和均匀，以减少液滴破裂的风险。 2. 考虑使用更适合的表面活性剂：不同的液滴系统可能对不同类型的表面活性剂有不同的需求。尝试不同的表面活性剂，以找到最适合您系统的稳定剂。 3. 优化液滴生成和操作参数：调整液滴的大小、流速和频率等参数，以找到最适合稳定液滴的操作条件。

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问求教，如图中，样品的扩增中是二聚体么？

科研小dog

可以跑一下琼脂糖凝胶电泳看看，二聚体位置一般在100bp以下，如果有的话，应该就是二聚体，建议重新设计引物。

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问如何避免qpcr阴性的污染

土井挞克树

每天要对这些区室进行清洁消毒，并紫外照射，特别是当阳性对照溅撒，环境检测阳性或者仪器污染时，严格按照消毒程序对区室消毒，并验证消毒效果。操作过程中避免手套接触可能被污染的地方，阳性对照最后加入，加后要特别注意枪头不要蹭到其他反应孔。

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问请问菌液PCR扩增产物多大比较合适（taq酶的）

凌晨三点Dxy

菌液pcr产物扩增的大小并不是固定的，可以根据实际需求进行选择。一般来说，如果需要检测菌液中是否存在某种特定的基因或者片段，可以选择扩增较大的片段，比如几百到几千bp的片段。这样可以更准确地检测出目标基因或片段是否存在，并且可以提供更多的信息。如果只需要检测菌液中是否存在某种细菌或病毒，可以选择扩增较小的片段，比如100bp左右的片段。这样可以更快地得到结果，并且可以减少扩增过程中可能出现的误差。

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问溶解曲线的峰不尖锐咋回事啊，是什么原因会导致这样的峰啊，或者说这样的峰是什么原因造成的

土井挞克树

这个考虑是体系中杂质太多的原因，建议纯化样品后再做

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问M13引物菌液PCR鉴定同一重组质粒的不同单菌落出现大小不一的条带是什么情况？

沫子大大

模板DNA的浓度可能会影响扩增产物的大小,但不同克隆在PCR反应条件上可能存在差异，如退火温度、延伸时间、引物浓度等。这些差异都可能导致扩增产物的大小存在差异。克隆体中可能存在着突变，这些突变可能会影响PCR扩增的结果。如果重组质粒存在染色体DNA污染，那么PCR扩增的产物大小也可能存在差异。

3 回答3410 围观

问请问我的目的产物在2176bp，以DNA为模板的时候PCR扩增，普通酶，延伸时间应该设置多久呢？

晓雨知春来

延伸时间通常为每1-2Kb/分钟。应该根据目的产物的长度，将延伸时间设置适当延长。

3 回答1017 围观

问R镜像文件丢失

dxyc42u

1.首先得看XML代码，肯定xml代码出现丢失values中的Color，Strings或者Drawable中的等等信息2.如果你的Xml代码有问题，clean一下绝对R文件丢失3.确认Xml代码没问题再尝试其他办法选中项目，点击 Project — Clean , 清理一下项目；选中项目，右键选择 Android Tools — Fix Project Properties

3 回答424 围观

问不同条件pcr，条带相同

沫子大大

基因扩增大小小于期望大小的原因可能有很多种，包括引物设计问题、扩增条件不恰当、DNA模板质量问题等。针对你提供的PCR条件，建议尝试以下优化：尝试增加退火温度，比如从45℃调整到50℃或更高的温度，看看是否能够增加扩增产物大小。延长延伸时间，比如从1分钟延长到2分钟。确保使用高质量的DNA模板，并检查模板DNA的浓度是否适当。如果以上优化步骤无法解决问题，建议尝试更换引物，并重新进行优化。

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问癌组织和癌旁组织PCR内参相差太大

dxyc42u

一般不会是内参的原因，有可能是逆转录时候加样不准

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