• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        想要做逆转录和qpcr但存在基因组DNA污染,请问有没有什么方法能最大限度的保留rna样品,并去除DNA的污染?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

        user-title

        北纬30度到此一游


        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        要最大限度地保留RNA样品并去除DNA污染,可以尝试以下方法:

        1. DNase消化:使用DNase酶对样品进行消化,以降解其中的DNA。这样可以有效地去除DNA污染,但需要小心控制反应条件和时间,以确保RNA不受到降解。

        2. DNase处理后的RNA再逆转录:在DNase消化后,使用逆转录酶将RNA转录成cDNA。由于DNase只能降解DNA而不影响RNA的逆转录,这将帮助你获取只包含RNA的cDNA。

        3. RNase H消化:RNase H是一种酶,特异性地降解RNA-DNA杂交分子。通过将RNase H添加到RNA-DNA复合物中,可以选择性地降解其中的DNA分子,而不影响纯RNA。

        4. RNA纯化柱/列:使用RNA纯化柱或列进行样品处理,这些柱或列能够选择性地结合RNA并去除DNA和其他杂质。根据柱或列的特性,你可以将样品通过它们,从而得到纯净的RNA。

        需要注意的是,这些方法可以帮助去除DNA污染,但无法保证完全去除所有DNA分子。因此,在进行逆转录和qPCR之前,最好进行一些质量控制检测,例如使用DNA特异性探针或引物来验证DNA污染的程度。

        user-title

        北纬30度到此一游user-title

        但我想要做逆转录,用了DNase的话会对逆转录产生影响的,这种影响请问怎么规避呢

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        1、使用DNA酶DNAse I 消化1小时,恒温37度。

        2、离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。

        3、直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含DNA。

        user-title

        北纬30度到此一游user-title

        请问氢氧化钠的浓度应该是多少呢,还有就是氢氧化钠对接下来的逆转录效率的影响怎么规避或减少呢

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        使用可以去除基因组

        DNA的逆转录酶

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以用dna裂解酶对dna进行降解,去除污染

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序