丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

想要做逆转录和qpcr但存在基因组DNA污染,请问有没有什么方法能最大限度的保留rna样品,并去除DNA的污染?

相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

user-title

北纬30度到此一游


wx-share
分享

4 个回答

user-title

loveliufudan

有帮助

要最大限度地保留RNA样品并去除DNA污染,可以尝试以下方法:

1. DNase消化:使用DNase酶对样品进行消化,以降解其中的DNA。这样可以有效地去除DNA污染,但需要小心控制反应条件和时间,以确保RNA不受到降解。

2. DNase处理后的RNA再逆转录:在DNase消化后,使用逆转录酶将RNA转录成cDNA。由于DNase只能降解DNA而不影响RNA的逆转录,这将帮助你获取只包含RNA的cDNA。

3. RNase H消化:RNase H是一种酶,特异性地降解RNA-DNA杂交分子。通过将RNase H添加到RNA-DNA复合物中,可以选择性地降解其中的DNA分子,而不影响纯RNA。

4. RNA纯化柱/列:使用RNA纯化柱或列进行样品处理,这些柱或列能够选择性地结合RNA并去除DNA和其他杂质。根据柱或列的特性,你可以将样品通过它们,从而得到纯净的RNA。

需要注意的是,这些方法可以帮助去除DNA污染,但无法保证完全去除所有DNA分子。因此,在进行逆转录和qPCR之前,最好进行一些质量控制检测,例如使用DNA特异性探针或引物来验证DNA污染的程度。

user-title

北纬30度到此一游user-title

但我想要做逆转录,用了DNase的话会对逆转录产生影响的,这种影响请问怎么规避呢

user-title

huarenqiang5

有帮助

1、使用DNA酶DNAse I 消化1小时,恒温37度。

2、离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。

3、直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含DNA。

user-title

北纬30度到此一游user-title

请问氢氧化钠的浓度应该是多少呢,还有就是氢氧化钠对接下来的逆转录效率的影响怎么规避或减少呢

user-title

dxyc42u

有帮助

使用可以去除基因组

DNA的逆转录酶

user-title

土井挞克树

有帮助

可以用dna裂解酶对dna进行降解,去除污染

ad image
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序