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        如何避免qpcr阴性的污染

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        dxy_ud0dpda4

        图片描述

        求教!如图,蓝色是样品,黄色是阴性的双孔,37开始扩增,所用的耗材都是新开封的无菌无酶耗材,为什么还是会有污染?怎么才能避免或去除?

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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        每天要对这些区室进行清洁消毒,并紫外照射,特别是当阳性对照溅撒,环境检测阳性或者仪器污染时,严格按照消毒程序对区室消毒,并验证消毒效果。操作过程中避免手套接触可能被污染的地方,阳性对照最后加入,加后要特别注意枪头不要蹭到其他反应孔。


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        loveliufudan

        有帮助

        可以采取以下措施:

        1. 分开前和后实验区域:将前PCR实验区域(样品处理、DNA提取等)和后PCR实验区域(qPCR试剂制备、扩增反应设置等)分开,使用不同的工作台、工具和试剂,避免交叉污染。

        2. 使用RNase/DNase抑制剂:在样品处理和反应液制备过程中,添加RNase/DNase抑制剂以防止外源DNA的污染。确保抑制剂的质量和有效性。

        3. 避免DNA模板污染:在DNA提取和样品处理过程中,严格控制实验条件,避免污染源接触DNA模板。使用专门的PCR工作台和无菌操作技术。

        4. 严格控制试剂污染:使用新鲜的试剂,并且避免多次冻融循环。分装试剂至小容器中,避免频繁开启原始试剂瓶。

        5. 设置阴性对照:为每个批次的qPCR实验设置阴性对照,包括无模板控制和模板替代物控制,以检测潜在的污染。

        6. 采用单向操作:在样品处理和实验过程中,使用单向操作,避免样品和试剂之间的交叉污染。使用专用的管嘴和滴管。

        7. 定期清洁和消毒实验器具:定期清洁和消毒实验器具,如PCR工作台、离心机、热循环仪等,以减少污染的风险。

        8. 定期验证实验流程:定期验证实验流程和质量控制措施,确保操作规范的执行和实验结果的准确性。

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        sswei

        有帮助

        PCR整个实验过程需要进行分区操作,样品准备区、核酸提取区、反应液制备区、pcr扩增区等,这些区域要独立,每一操作步骤都严格按照区室进行,不能混用防止污染。每天要对这些区室进行清洁消毒,并紫外照射,特别是当阳性对照溅撒,环境检测阳性或者仪器污染时,严格按照消毒程序对区室消毒,并验证消毒效果。操作过程中避免手套接触可能被污染的地方,阳性对照最后加入,加后要特别注意枪头不要蹭到其他反应孔。


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