全部

chengyi1228 各位前辈，我准备做内质网应激通路eIF2a、P-eIF2a两个蛋白的 Western blot。请问谁有这方面经验可以交流一下么？对细胞处理后多久提P-eIF2a蛋白比较合适呢？谢谢~batiwangna 内质网应激比较急，具体时间自己摸索，不过建议不要超过24h辉辉8916 请问你们还做内质网应激的其他通路吗？像ATF6的检测，是用全蛋白还是核蛋白？冒泡的快快 我也需要做这个，我导师让我做一个时间梯度，15分钟 ...

紫色云龙 本人初做细胞，想各位大虾多多指教。不胜感激。目前的课题做wista大鼠肾上腺细胞原代培养，（也可以做人肾上腺细胞，可以买的到，考虑到没有经验，加上大鼠肾上腺提取也可以做）。试 剂：hank‘s缓冲液（漂洗用），培养基【DMEM/F12，gibco胎牛血清（用10%），双抗（青链）（用1%）】，胰酶（用大概0.1%），胶原酶1型（用0.1%），透明质酸酶（未到货）主要仪器:常规东西（枪头，酒精灯，打火机等），3套取材器械，400目不锈钢网筛，5 ...

biokook 如题，谢谢大家了。zjubell biokook wrote:如题，谢谢大家了。你要做什么序列分析？mapping? denovo?大部分优秀的高通量序列分析软件全是在linux下的velvet, soap, bowtie, etc，还没找到有多少是windows下的biokook zjubell wrote:你要做什么序列分析？mapping? denovo?大部分优秀的高通量序列分析软件全是在linux下的velvet, soap, bowt ...

曹会 我看文献中有利用anti-miR miRNA inhibitor也有 mi-RNA inhibitor 哪位帮忙解释一下两者有何区别区别baby_susan Anti-miR? miRNA InhibitorsAmbion? Anti-miR? miRNA Inhibitors are chemically modified, single stranded nucleic acids designed to specifically bind to and inhibit endogenous microR ...

曹会 各位大侠帮忙指点一下，我打算做miRNA的实验，试剂商有 miRNA mimic 和Pre-miR? miRNA ,不知道两者有什么区别，如果订购试剂的话 哪家的性价比较高，转染试剂用的是什么啊 ，希望有关miRNA给点建议，谢谢！！！！！！！！！！奇志 加我qq1787361906baby_susan miRNA mimic 模拟生物体内源的miRNAs，运用化学合成的方法合成，能增强内源性miRNA的功能。Pre-miRNA是对应miRNA的前体曹会 baby ...

七叶禾0916 想要将细胞培养板重复利用，要怎样处理呢，有人说用酸泡过夜，再用自来水和蒸馏水冲，再用酒精浸泡过夜，再紫外灭菌2h，不知应该用什么酸泡，这样处理效果怎样？求高手指教！！！wendywan 可以用酸泡一夜，然后单蒸水冲掉酸，后双蒸水冲至少三遍以上，这是最少的。然后紫外灭菌，时间可以长一些，放在超净台里照着就好了。酸一般可以用浓硫酸加重铬酸钾，比例在网上查一下就可以了！完了之后，可以在用之前重新包被板子，这样的话，效 ...

minlei219 如题：经过构建的稳定转染细胞株，含有GFP的，但是荧光并不是100%有，怀疑荧光是稳定表达的吗？会丢失吗？如果丢失的话，原理是什么啊？谢谢谢谢。minlei219 说明一下，细胞是购买的，应该是筛选过的slytjiaofei 稳定转染GFP细胞株只能保证GFP整合入了细胞基因组，但是整合的位置可能并不完全相同，由于转基因往往存在位置效应，所以有的细胞可以表达GFP，但有的细胞虽然也整合了GFP基因，但并不 ...

docado 我要做乳腺癌细胞siRNA瞬时转染，不知道哪里的转染试剂比较好用、可靠。Invitrogen公司的脂质体LipofectamineTM-2000 德国QIAGEN公司Attractene Transfection Reagent北京英恩格公司的EntransterTM -R这些是否有人用过，转染效果怎样？非常感谢！！！baby_susan 我们用的最多的是 Invitrogen公司的脂质体LipofectamineTM- ...

d调华丽 求大肠杆菌 lpp（脂蛋白）启动子的序列~谢谢吴佰霖 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/946175下载基因组fasta序列，计算lpp在里面的位置d调华丽 吴佰霖 wrote:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/946175下载基因组fasta序列，计算lpp在里面的位置怎么计算？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师 ...

jiaojiaoliu922 前些日子根据miRNA芯片结果，挑选了几个miRNA做验证。订了ABI的taqman探针，到货后做预实验，出现问题：realtime PCR的结果：内参RNU48的cycle数在22左右；有一个miRNA的cycle数在20左右；其他几个miRNA的cycle数都在35。预实验做了两遍，都是这种情况。请大家帮忙分析一下情况。指点一下后面该怎么做。谢谢！吴佰霖 内参RNU48的cycle数在22 ...

immyself 有那种干了之后会把盖玻片牢牢粘著的吗？现在用的封片剂是液态的，老是滑来滑去谢谢！hongfunv1984 我最近也在做细胞免疫荧光，也是发现这个问题。后来发现是防淬灭剂加的太多了，现在在做实验室就没有这种情况了。。你可以稍加一点就行了。用1undefined10的盖玻片封片。photomedicine 是的，防淬灭剂不能加太多，否则会滑来滑去，加1-2滴其实就够了。然后加上盖玻片，再在盖玻片周边用指甲油封装，指甲油很容易挥 ...

chengyang2872 各位师兄师姐好！我是一名刚刚开始做实验不久的研究生，只知道做PCR。我的导师说他的课题想测β-catenin（WNT通路）在肝癌细胞中表达的量，要用流式细胞术测，交给我做。可是我没有接触过这类的东西，所以想请教一下师兄师姐，β-catenin这个蛋白是存在于细胞核内，还是在细胞质中，还是分泌到细胞外？ 另外我用流式细胞术应该怎么测试这个蛋白？或者有没有哪位师兄师姐有这方面的资料，可以传给我的，感 ...

love925929 有哪位大虾知道BMP/Smad信号通路的化学抑制剂？急等，谢谢！徐旖旎 楼主，你得到答案了吗？能否共享一下？坚持不懈ing 你好，我现在也需要做点，你找到了吗本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

valerie2011 各位园友大家好我在一个靶基因库中查到miRNA-28-5p的靶基因有IKBKB，在pubmed中查到IKBKB also known as IKK2,IKKB,NFKBLKB,FLJ33771,FLJ36218,MGC131801等。但我在有的靶基因库中查到的靶基因是FLJ38028,或是FLJ36031，MGC35097，想请教一下，FLJ后面的数字代表什么啊？ 是表示基因序列长度吗？在pubmed上面查FL ...

viola2010 您好，我是新手，pten (loxp/loxp)中loxp是什么意思？Fsp-cre中cre什么意思啊？谢谢woxingwosu 是基因敲除的一种手段。基本原理可见http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/CreLoxP.htmlviola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好 ...

huaxiflame05 各位，我的实验最近遇到了问题，检测一个趋化因子，Western 重复性很差，只有蛋白上样量接近200ug的时候才能勉勉强强看到很弱的条带，并且杂带很多。师兄建议让公司合成纯化蛋白。但问题是原核表达的蛋白分子量35kDa，在真核系统里，这个蛋白质高度糖基化，分子量可达到60kD。在这种情况下，如何构建阳性对照呢？**解答magichunter 换成单克隆抗体应该特异性更好些。另外，你不能用与实验动物相 ...

紫叶竹韵 做IP，之后Western 分析，看到有两条带，在25和50KD左右，应该是抗体的两条带，但是我的目的蛋白也是52KD的，这该怎么区分呢。woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做（比如说IP用鼠的抗体，WB就用兔的抗体），这样就不会检测到抗体的两条带。如果没有不同来源的抗体的话，就要做IP的时候尽量少放点抗体，跑胶跑得远一点，使得目的蛋白能够被看到，不过由于你的蛋白是在是太接近重链了，要分开难度还 ...

48126 http://www.univ-bio.com/Products.asp我在优宁维的网站上查到很多关于C-JUN的抗体，磷酸化又分很多种，不知道如何选择，有知道的战友指点一下，谢谢！我要准备做WB,IHC.biolinkphilic 我觉得如果真想在这家公司购买，咨询该公司就可以了。其实专业的抗体网站看看就知道应该要了解那些信息。如Abcam、santa cruz和cst等等最后，提供一个学习的博客，可以看看http:/ ...

一光年 最近要做生殖的细胞方面的实验，前期一直用在垂体细胞原代培养，但是一直困扰没有促性腺激素细胞系，但是在网络中搜索，发现老外的文章中经常提到αT3-1，LβT2 或LβT4细胞系，在ATCC等知名的细胞库也未发现这些细胞系，不知道各位高手指点在哪里可以找到这几种细胞系？不甚感激！！veimojie 我一直也在做这方面的研究 什么地方能有啊 ？banana_smile 我也想做这方面的研究，恳请知道的大虾告之beastjane “一光年 ...

zxmgugl 最近在查某个基因的启动子区CpG岛，发现一个问题：在一个CpG finder的软件上，如果输入的是这个基因第一个外显子第一个碱基的上游序列，能反馈出一段CpG岛（虽然长度只有50多bp，这点也很奇怪，因为这个在线软件的CpG岛界定标准就是长度大于200bp）；如果输入的是这个基因第一个外显子序列内第一个出现的ATG序列的上游序列的话，软件又分析出一段除了前面那个CpG岛，一段更长的CpG岛。所以，就有 ...