【求助】信号通路抑制剂使用前的MTT实验？
丁香园论坛
2004
买的信号通路抑制剂（PDTC，LY294002，SB203580），用之前是不是一般都需要做个细胞活力检测的？如台盼蓝或MTT？
做MTT的话，一般是设几个不同的浓度组，作用一定时间（24h?）后检测？
是这样设计的吗？
那不同的抑制剂浓度分组一般选择哪几个浓度呢？是按说明书规定的作用范围在其中选择几个组，还是参考文献？但这方面类似文献看到的好像不是很多，感觉别人一般都不做或者不把其作为结果放上去，所以也无从参考。
然后作用时间的话，24h应该够了吧？
有战友做过类似实验的吗？可否介绍一下你们的实验方法。谢谢!
做MTT的话，一般是设几个不同的浓度组，作用一定时间（24h?）后检测？
是这样设计的吗？
那不同的抑制剂浓度分组一般选择哪几个浓度呢？是按说明书规定的作用范围在其中选择几个组，还是参考文献？但这方面类似文献看到的好像不是很多，感觉别人一般都不做或者不把其作为结果放上去，所以也无从参考。
然后作用时间的话，24h应该够了吧？
有战友做过类似实验的吗？可否介绍一下你们的实验方法。谢谢!
我觉得没必要做MTT，因为这些信号通路都是比较基本的通路。一旦被阻断，细胞代谢必然受影响。而不被阻断，则没有达到阻断的目的。所以做MTT没有任何意义。
有的文献会提到这些抑制剂的浓度，不过具体到你的实验，取决于你的细胞，不同细胞中相应的信号通路强弱不一。但范围一般在1um-100um之间，最佳浓度的确定可以通过使用这个范围抑制剂处理细胞，同时用相应报道过的（或你感兴趣的激活剂）可以激活该通路的激活剂来处理细胞，然后检测直接下游分子的激活来检测抑制剂在什么浓度发挥作用，最佳浓度则是能阻断激活的最低浓度。
Good luck!
有的文献会提到这些抑制剂的浓度，不过具体到你的实验，取决于你的细胞，不同细胞中相应的信号通路强弱不一。但范围一般在1um-100um之间，最佳浓度的确定可以通过使用这个范围抑制剂处理细胞，同时用相应报道过的（或你感兴趣的激活剂）可以激活该通路的激活剂来处理细胞，然后检测直接下游分子的激活来检测抑制剂在什么浓度发挥作用，最佳浓度则是能阻断激活的最低浓度。
Good luck!
chp_cn wrote:
我觉得没必要做MTT，因为这些信号通路都是比较基本的通路。一旦被阻断，细胞代谢必然受影响。而不被阻断，则没有达到阻断的目的。所以做MTT没有任何意义。
有的文献会提到这些抑制剂的浓度，不过具体到你的实验，取决于你的细胞，不同细胞中相应的信号通路强弱不一。但范围一般在1um-100um之间，最佳浓度的确定可以通过使用这个范围抑制剂处理细胞，同时用相应报道过的（或你感兴趣的激活剂）可以激活该通路的激活剂来处理细胞，然后检测直接下游分子的激活来检测抑制剂在什么浓度发挥作用，最佳浓度则是能阻断激活的最低浓度。
Good luck!
谢谢！那参考文献好像一般都是选择10uM的浓度，应该不会对细胞产生毒性作用吧？如果不做MTT之类的活力检测的话，投稿时reviewer会不会问啊？
我想你所谓的毒性，就是除了阻断该信号通路之外由于浓度过高导致的off target效应吧，但你做一下我上面提到的实验应该可以解决这个问题。reviewer问的话说明他不懂。
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