• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        【求助】信号通路抑制剂使用前的MTT实验?

        丁香园论坛

        2036
        买的信号通路抑制剂(PDTC,LY294002,SB203580),用之前是不是一般都需要做个细胞活力检测的?如台盼蓝或MTT?

        做MTT的话,一般是设几个不同的浓度组,作用一定时间(24h?)后检测?

        是这样设计的吗?

        那不同的抑制剂浓度分组一般选择哪几个浓度呢?是按说明书规定的作用范围在其中选择几个组,还是参考文献?但这方面类似文献看到的好像不是很多,感觉别人一般都不做或者不把其作为结果放上去,所以也无从参考。

        然后作用时间的话,24h应该够了吧?

        有战友做过类似实验的吗?可否介绍一下你们的实验方法。谢谢!
        我觉得没必要做MTT,因为这些信号通路都是比较基本的通路。一旦被阻断,细胞代谢必然受影响。而不被阻断,则没有达到阻断的目的。所以做MTT没有任何意义。

        有的文献会提到这些抑制剂的浓度,不过具体到你的实验,取决于你的细胞,不同细胞中相应的信号通路强弱不一。但范围一般在1um-100um之间,最佳浓度的确定可以通过使用这个范围抑制剂处理细胞,同时用相应报道过的(或你感兴趣的激活剂)可以激活该通路的激活剂来处理细胞,然后检测直接下游分子的激活来检测抑制剂在什么浓度发挥作用,最佳浓度则是能阻断激活的最低浓度。



        Good luck!
        chp_cn wrote:
        我觉得没必要做MTT,因为这些信号通路都是比较基本的通路。一旦被阻断,细胞代谢必然受影响。而不被阻断,则没有达到阻断的目的。所以做MTT没有任何意义。

        有的文献会提到这些抑制剂的浓度,不过具体到你的实验,取决于你的细胞,不同细胞中相应的信号通路强弱不一。但范围一般在1um-100um之间,最佳浓度的确定可以通过使用这个范围抑制剂处理细胞,同时用相应报道过的(或你感兴趣的激活剂)可以激活该通路的激活剂来处理细胞,然后检测直接下游分子的激活来检测抑制剂在什么浓度发挥作用,最佳浓度则是能阻断激活的最低浓度。

        Good luck!


        谢谢!那参考文献好像一般都是选择10uM的浓度,应该不会对细胞产生毒性作用吧?如果不做MTT之类的活力检测的话,投稿时reviewer会不会问啊?
        我想你所谓的毒性,就是除了阻断该信号通路之外由于浓度过高导致的off target效应吧,但你做一下我上面提到的实验应该可以解决这个问题。reviewer问的话说明他不懂。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】信号通路抑制剂使用前的MTT实验?

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序