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        【讨论】验证是否为mRNA的方法

        丁香园论坛

        2289
        本人刚用了提poly(A)尾RNA的盒子提了mRNA,扩了内参(b-actin),有条带,但不知道怎么样才能证明就是mRNA,求高手指点
        能不能跑一下PAGE胶,看看条带位置啊?
        谢谢您的回复~~跑了普通的0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳,但出来了三条带,跟totalRNA 的位置相似


        wlh0369 wrote:
        能不能跑一下PAGE胶,看看条带位置啊?
         




        谢谢您的回复~~跑了普通的0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳,但出来了三条带,跟totalRNA 的位置相似
        xan36 wrote:
        本人刚用了提poly(A)尾RNA的盒子提了mRNA,扩了内参(b-actin),有条带,但不知道怎么样才能证明就是mRNA,求高手指点

        你的引物有没有跨内含子?
        如果是的,那产物拿去测序验证好了,这个是金标准。
        或者做一个巢式PCR,内外侧的扩增产物bp数跟预期都相同,那一般就错不了
        zjubell wrote:
        你的引物有没有跨内含子?
        如果是的,那产物拿去测序验证好了,这个是金标准。
        或者做一个巢式PCR,内外侧的扩增产物bp数跟预期都相同,那一般就错不了


        谢谢您的回复!

        我是已知一条RNA上的一段片段,现在想得到其全长序列,不知道该采取什么办法。现在是想证明它就是mRNA,然后就可以直接做RACE了。请问,如果不是mRNA的话,有什么好的方法得到其全长序列吗?
        从结果上看,你的mRNA似乎很不纯,有大量rRNA和tRNA存在,所以我建议你用poly(T)作为引物做一下RT,再用RNA酶消化样品,最后用特异引物做PCR得到全长
        bigbang_0_0 wrote:
        从结果上看,你的mRNA似乎很不纯,有大量rRNA和tRNA存在,所以我建议你用poly(T)作为引物做一下RT,再用RNA酶消化样品,最后用特异引物做PCR得到全长


        好的,谢谢
        路过,顶!

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