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        【求助】绿色荧光蛋白转染问题

        丁香园论坛

        3410
        最近使用pEGFP(增强型绿色荧光蛋白基因)做的转染,虽然转染细胞阳性率不低,但是绿色荧光蛋白表达跟以前相比较很少(转染剂量是一样的)。最初怀疑是细胞状态问题,重新复苏细胞后,没有改善;后将Hela细胞换为HepG 2细胞后,结果仍然不理想。我怀疑是不是我们的质粒突变了呢,就是转录或者是表达蛋白的能力下降。因为有一批提的质粒做的转染根本没有表达。请大虾们给支支招哈!
        liufengxi wrote:
        最近使用pEGFP(增强型绿色荧光蛋白基因)做的转染,虽然转染细胞阳性率不低,但是绿色荧光蛋白表达跟以前相比较很少(转染剂量是一样的)。最初怀疑是细胞状态问题,重新复苏细胞后,没有改善;后将Hela细胞换为HepG 2细胞后,结果仍然不理想。我怀疑是不是我们的质粒突变了呢,就是转录或者是表达蛋白的能力下降。因为有一批提的质粒做的转染根本没有表达。请大虾们给支支招哈!

        你们用的是什么转染试剂?

        如果前后实验用的相同的转染试剂,并且转的质粒也是同一种质粒的话,那么问题很可能在于你提的质粒质量上,细胞转染对于质粒的质量要求比分子要高很多,参数要正常,质粒的浓度也不能太低,还有对于某些细胞最好是去内毒素的。HeLa细胞总体还是属于比较好转染的类型的。
        选择合适的转染试剂,应该能解决你现在的问题

        对hela,建议选择PolyFect Transfection Reagent(qiagen),效果不错

        另附上一份资料,看完就明白了
        谢谢!

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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