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        【求助】请教关于xbaI酶切位点甲基化的问题(看了这么多帖子,都好象没分析到位啊)

        丁香园论坛

        9791
        在xbaI酶切位点上:T^CTAGA碱基对应的是AGATC^T,因为质粒是双链,所以在质粒的xbaI酶切位点上中间肯定有GATC,所以说:我觉得理论上只要是dam+细菌提出来的质粒,xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开.但是我见过别人也是用dam+菌扩增过质粒,用xbaI也可以切开它的酶切位点~~~所以我就迷糊了,请各位大侠们多多指点,小弟在此感激不尽了~~~
        顶,有没有人知道啊,急啊,谢谢大家了
        我的意思是不是没说清楚啊,呵呵,不好意思啊

        我的意思是在xbaI酶切位点上,双链中的其中一条链肯定是 AGATC^T ,这个酶切位点中间本身就有dam甲基化的识别序列,所以只要是dam+细菌提出来的质粒,xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开,但实际并非如此,请大家指教啊!!!!! !
        我今天用了takara的

        E.coli Competent Cells HST04 dam-/dcm-
        感受态细菌,但是酶切还是没有成功,我不知道为什么了,请大家支招,在下谢过了先
        我碰到这个问题,构建质粒时,下游引物的设计 在终止密码子TGA后接个xba I 酶切位点,抽质粒后xba I 老是切不开,后来在一本书上看到答案。

        The restriction enzyme recognition site doesnot have to span the entire methylation site to be blocked. Overlapping methylation sites can cause

        a problem. An example is the XbaI recognition site 5- TCTAGA 3 . Although it lacks the GATC dam methylase target,

        if the preceding 5 two bases are GA giving GATCTAGA or the following 3 two bases are

        TC giving TCTAGATC, then the dam methylase blocks XbaI from cutting.

        ——Molecular Biology Problem Solver: A Laboratory Guide.
        顶顶顶

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】请教关于xbaI酶切位点甲基化的问题(看了这么多帖子,都好象没分析到位啊)

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