病毒感染细胞实验

一、构建目的基因到载体构建手段，一般是根据原始质粒信息确定克隆方案，有以下两种手段。（1）如果原始质粒与载体有匹配酶切位点，采用相应的内切酶切下相应片段，回收并连接到载体，酶切，并测序鉴定（2）如果没有匹配的酶切位点，则设计带有特殊接头的引物进行PCR扩增，得到目的片段，采用相应的内切酶切下相应片段，回收并连接到穿梭载体，酶切，并测序鉴定二、质粒DNA在大肠杆菌里转化连接上目的基因的质粒转化大肠杆

1．准备目的细胞（1） 从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，并不时摇动使其尽快解冻。（2） 完全解冻后，1300 rpm，离心 3 min，75% 酒精擦拭冻存管消毒后，移至生物安全柜。（3） 吸去冻存液上清，加入 1 mL 新鲜的完全培养基重悬细胞，将细胞悬液接种至含有 3 mL 完全培养基的 6cm 培养皿中，轻轻晃匀后置于37℃、5% CO2培养箱。（4） 24 h 后更换一

1．准备目的细胞（1） 从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，并不时摇动使其尽快解冻。（2） 完全解冻后，1300 rpm，离心 3 min，75% 酒精擦拭冻存管消毒后，移至生物安全柜。（3） 吸去冻存液上清，加入 1 mL 新鲜的完全培养基重悬细胞，将细胞悬液接种至含有 3 mL 含完全培养基的 6cm 培养皿中，轻轻晃匀后置于37℃、5% CO2培养箱。（4） 24 h 后更换

1．准备目的细胞（1） 从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入 37℃ 水浴中，并不时摇动使其尽快解冻。（2） 完全解冻后，1300 rpm，离心 3 min，75% 酒精擦拭冻存管消毒后，移至生物安全柜。（3） 吸去冻存液上清，加入 1 mL 新鲜的完全培养基重悬细胞，将细胞悬液接种至含有 3 mL 含完全培养基的 6cm 培养皿中，轻轻晃匀后置于37℃、5% CO2培养箱。（4） 24 h 后更换

为了确认合适的感染条件，按照不同培养条件将实验分为 4 组：A 组：常规培养基组，观察常规培养条件下病毒对细胞的感染效果；B 组：添加 HitransG A（简称 A 液）的常规培养基组，观察 HitransG A 是否可以提升感染效果；C 组：添加 HitransG P（简称 P 液）的常规培养基组，观察 HitransG P 是否可以提升感染效果；Control 组：监控实验过程中细胞生长是否

在哺乳动物细胞中产生稳定的细胞系时，如果表达系统携带耐药基因，则通过在培养基中添加抗生素药物来选择稳定转染/转导的细胞是一种有效的方法。由于哺乳动物细胞对抗生素的敏感性因细胞类型而异，因此必须通过单独的杀伤曲线实验来确定杀死非转染或非转导细胞所需的抗生素的最低浓度