原理
适用范围： 直接靶向视网膜细胞，特别是光感受器细胞和视网膜色素上皮 (RPE) 的金标准方法。
材料与仪器
关键工具： 手术显微镜、配备 33-34G 钝头针 的 Hamilton 注射器。
病毒与体积： 每只眼准备 1–2 µL 稀释后的 AAV 溶液。
动物与眼部准备： 麻醉小鼠并置于加热垫上。使用散瞳剂充分散大瞳孔。在角膜上滴加粘弹剂并覆盖盖玻片，作为接触镜以便清晰观察视网膜。
步骤
1.病毒注射：双针技术
制作穿刺口（巩膜预穿刺）：首先，使用锋利的 30G 针头，在角膜缘后方的巩膜上制作一个微小、表浅的穿刺口，为后续注射建立安全通道。
插入钝头针：将已装载病毒的钝头针从此预制孔中轻柔插入。
定位视网膜下腔：在显微镜下，将针头向眼球后方推进，直至首次感到轻微阻力。这是最关键的触觉反馈，表明针尖已到达 RPE 层，应立即停止推进。
注射并形成「水泡」： 缓慢注入病毒。成功的注射，可通过观察到视网膜上形成一个清晰的、水泡状的隆起（即视网膜脱离泡）来确认。
2.完成与恢复
水泡形成稳定后，缓慢拔出针头，在眼部涂抹抗生素眼膏。将动物放于 37°C 的恒温箱中恢复，直至完全清醒。
图片来源：Subretinal Injection of Viral Vectors into the Retinal Pigment Epithelium in a Mouse Model
来源：丁香实验
