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WB 实验大赛
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实验方法
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问
WB中单克隆抗体和多克隆抗体应该如何选择？有何区别？
loveliufudan
选择使用单克隆抗体或多克隆抗体需要根据实验目的来决定:1. 单克隆抗体- 具有更高的特异性,只识别抗原上的单一表位。- 识别性更强,背景较清晰。- 更适合识别蛋白的不同修饰形式。- 批次间效果一致性较好。2. 多克隆抗体- 识别抗原上的多个表位,不容易失活。- 灵敏度高,通常可以检测到更低丰度的蛋白。- 更适合检测总蛋白表达水平。- 批次间效果差异大。综合考虑目标蛋白的丰度、所需识别的特异性区域等
6 回答
9267 围观
问
WB情教求助，加了四个样本，目的条带出现了六个（额外的两个是最左边marker孔和
sswei
可能的原因：1.样品本身纯度不够；2.所用的溶剂（例如loading buffer）含有蛋白质污染；3.目的蛋白发生降解，杂带实际是目的蛋白的分解肽段
3 回答
688 围观
问
WB电泳晕开了是什么情况
麻黄连翘赤小豆
胶的问题，可能是浓缩胶和分离胶的tris-HCl的ph有问题也可能是电泳液PH问题loading buffer的问题
3 回答
1073 围观
问
WB整膜一抗怎么敷
loveliufudan
通常分为两个步骤。以下是一般的步骤： 1. 样品处理和电泳：首先，您将蛋白样品经过电泳分离，并转移到膜上。这可以通过SDS-PAGE等方法完成。在转膜之前，您可以在凝胶中加入分子量标记物以便于确定目标蛋白的位置。 2. 阻断：转膜完成后，您需要对膜进行阻断（blocking），以防止非特异性结合和减少背景信号。常用的阻断剂包括牛血清蛋白（BSA）、脱脂乳清蛋白（skim milk）等。选择合适的阻
3 回答
3305 围观
问
wb真的是玄学—wb条带不均匀
skyye
这个首先还是考虑是胶不均匀的问题。配胶时各成分需要充分混匀，配好胶后尽快使用，在4℃保存不超过一周
4 回答
1863 围观
问
WB突然目的蛋白不显带了
dxyc42u
应该是抗体的问题，换个抗体跑一次看看
3 回答
901 围观
问
骨组织wb内参不齐怎么整？
dxy_gwrp7ndq
不齐可以进行定量分析，然后用目的蛋白除以内参。定量用image plus6
4 回答
923 围观
问
求助WB，marker处出现了蛋白
balalaLy
前面一组的marker上那个亮点看着像是杂质
2 回答
464 围观
问
做WB时，小分子转膜时间怎么控制？
是TTT
普通Western转膜液200mA，一分钟转1kd，10-30kd转10-30分钟。小分子wb没有条带可能不在于转膜没成功，关键在电泳，可以调整下层胶浓度跑小分子蛋白
4 回答
6348 围观
问
WB最近遇到了好多问题，求帮助！
z流沙z
1、配胶要充分混匀，没有杂质，样品要离心取上清，不要混有颗粒状物质或者细胞沉淀。2-3、小分子蛋白可以配高浓度如15%的胶，减少电泳和转膜时间，比如电泳80v 30min和120v 至分开即可，像你蛋白这么小的转膜200mA 1h完全足够
3 回答
1453 围观
问
WB的上样浓度
loveliufudan
一般来说，上样浓度应该根据样品浓度、希望检测的蛋白质浓度和电泳系统的灵敏度来确定。上样浓度过高会导致样品堆积和条带模糊，而上样浓度过低会导致信号弱。通常情况下，建议将上样浓度设置在1-4之间。在优化实验时，可以使用不同的上样浓度进行试验，并比较结果，选择最佳的上样浓度。此外，还可以尝试调整其他实验条件，例如运行时间、电泳缓冲液pH值、电压等，以获得最佳的结果。
4 回答
967 围观
问
各位大佬，我这个蛋白不压缩是怎么回事啊，一大坨下来了，marker也能散开点，电压是80v,胶凝固的时间按说明书上来的
balalaLy
marker没问题，胶没问题，所以应该是loading buffer的问题，有些loading里面含有的巯基乙醇量少或者没有就会压缩不好
3 回答
577 围观
问
WB各组间内参的条带差异较大，可能的原因是什么，如何避免。
府宅
WB最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是您敷抗体的时候敷的不均匀。建议您在仔细的做几遍也可能是在显影液环节，简单来说就是您的膜没有淋干净，上面残留参差不齐的 T/TBS，T/TBS 能稀释显影液，目的条带本来表达量就少，某一个点残留的 T/TBS 稍微多一点就可能导致显影效果下降，所以建议在显影液反应前，尽量将膜上的洗膜液淋掉
5 回答
442 围观
问
原核表达了目的蛋白融合蛋白88.3kDa，样品同时跑了两块SDS-PAGE一个做了考马斯亮蓝一个做了WB，但是WB条带很怪异
小镇少年在学习
第一建议Wb再重新做一下，弄个清晰的条带，方便确定蛋白是否表达。其次80多kd蛋白已经有点稍微大了，如果不表达，建议考虑真核系统
5 回答
458 围观
问
wb条带弥散怎么回事？
bamboopiggy
你说的是右侧的那一团黑色吗？不是弥散，是你加抗体的时候。不知道怎么把膜给弄伤了，出现非特异结合了。
4 回答
2421 围观
问
细胞水平要做WB，多少细胞提的蛋白够做WB？跟细胞类型有关吗？
whilt-shirt
基本上10^6细胞就够了，可以再多一点
5 回答
5492 围观
问
有人跑过hes5，light的wb吗？跑了结果不理想，有什么条件跑wb供参考吗。提这2种蛋白有特殊的吗？
bamboopiggy
你所谓的结果不理想是条带不清楚还是没有？条带不清楚，可以尝试增加抗体浓度或上样量，没有条带可以尝试跑全膜
2 回答
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