• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        WB整膜一抗怎么敷

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        zddream2016

        WB整膜怎么敷一抗啊?分两次敷吗?

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        通常分为两个步骤。以下是一般的步骤:

        1. 样品处理和电泳:首先,您将蛋白样品经过电泳分离,并转移到膜上。这可以通过SDS-PAGE等方法完成。在转膜之前,您可以在凝胶中加入分子量标记物以便于确定目标蛋白的位置。

        2. 阻断:转膜完成后,您需要对膜进行阻断(blocking),以防止非特异性结合和减少背景信号。常用的阻断剂包括牛血清蛋白(BSA)、脱脂乳清蛋白(skim milk)等。选择合适的阻断剂并进行适当的浓度优化。

        3. 一抗孵育:将一抗稀释到适当的浓度中,根据实验需要在阻断液中孵育膜。一抗与目标蛋白特异性结合,形成一抗-蛋白复合物。孵育时间一般为数小时至过夜,可以根据实验要求和抗体的特性来确定最佳的孵育时间。

        4. 洗涤:将膜从一抗溶液中取出,进行多次洗涤以去除非特异性结合的一抗。洗涤液一般为含有Tween 20的缓冲液,如Tris-buffered saline with Tween (TBST)。

        5. 二抗孵育:选择合适的二抗(secondary antibody),将其稀释到适当的浓度中,根据一抗的动物源(如兔、小鼠等)和实验所用的检测方法(如辣根过氧化物酶-HRP或碱性磷酸酶-AP等)进行选择。将膜孵育于二抗溶液中,使其与一抗-蛋白复合物发生反应。

        6. 洗涤和显色:将膜从二抗溶液中取出,进行多次洗涤以去除非特异性结合的二抗。最后,使用适当的显色剂,如ECL(Enhanced Chemiluminescence)试剂盒,检测目标蛋白的信号。

        user-title

        sswei

        有帮助

        一抗(3%脱脂牛奶抗体稀释液),加TBST按适当比例稀释一抗。然后裁下一块封口膜折成小船,铺于湿盒中,将脱脂奶粉加到小船中,用移液枪把一抗注进奶粉溶液里,摇床上摇一会,膜蛋白面朝下,放于抗体液面上,掀动膜四角以赶出残留的气泡;摇床上摇半小时后,放在湿盒中,在4℃下过夜,一抗孵育完成。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        如果膜比较大的话只能分开敷了,但是要注意孵育的条件要保持一致

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序