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        WB突然目的蛋白不显带了

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_d1iuln93

        一周之前目的蛋白和内参都是正常出条带,然后突然有一天目的条带不出了,曝出来的图maker特别黑,感觉抗体被敷在maker上了,但是内参正常,试过提高抗体浓度,换maker,都不行,最近一次把maker剪掉敷抗体,目的蛋白就显带了,再加上maker敷抗体条带依然不出,这是怎么回事呀

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        3 个回答

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        应该是抗体的问题,换个抗体跑一次看看

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是抗体的特异度差,更换抗体后再跑一次

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        有可能存在以下原因:

        1. 抗体问题:目的蛋白条带不显的原因可能与抗体相关。可能抗体质量有问题,如失活、变性或过期。确保使用高质量、新鲜的抗体,并且在使用前进行适当的质量控制和验证实验。

        2. 样品问题:目的蛋白样品可能存在问题,如降解、聚集或浓度不足。确保样品的完整性和质量,避免样品受到温度、酶活性或其他因素的影响。

        3. 免疫检测条件:检测条件也可能对结果产生影响。确保免疫检测的缓冲液、温度、时间等参数都是正确的,并且按照建议的步骤进行操作。

        4. 其他因素:其他因素,如洗涤步骤、蛋白质迁移和转膜过程等,也可能对结果产生影响。确保操作过程中的每个步骤都正确,并且排除实验操作上的潜在误差。

        根据你的描述,剪掉maker敷抗体后目的蛋白条带显现,说明目的蛋白和抗体之间可能存在相互干扰。这可能是由于某些成分或特性导致的。你可以考虑尝试不同的抗体、不同的条件或实验流程来解决这个问题。

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