WB 实验大赛

一、单层贴壁细胞总蛋白的提取：1. 倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。2. 每瓶细胞加 3 ml 4℃ 预冷的 PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动 1 min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将 PBS 弃净后把培养瓶置于冰上。3. 按 1 ml 裂解液加 1

操作流程 (1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张，吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。 (2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in，将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。 (3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上，然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上，如果是米用半干转的方式进行蛋白质转印，那么宜用三张滤纸。将玻璃板翻转 ，并且将其

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检测目标蛋白含量变化

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Western blotting 主要用于检测蛋白质，其技术流程分为蛋白质电泳分离、蛋白印迹（转膜）和免疫检测三个步骤。