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实验问答

31,548,602 科研人在看

问人群血清IgG 正常值测定示例法的工作原理是什么？

府宅

单向免疫扩散实验——人群血清IgG 正常值测定示例发实验原理：将一定量抗体混匀于琼脂糖凝胶内制板、打孔、在凝胶孔中参加标准抗原溶液或待测样本。抗原在凝胶中向四周呈辐射状扩散并与凝胶中的抗体发生特异性结合反响，在抗原抗体比例适宜处形成白色沉淀环。沉淀环的大小与抗原的浓度成正比。以不同浓度标准抗原液制成标准曲线，通过沉淀环大小（直径）可在标准曲线上査出待测标本中相应抗原的浓度。

2 回答1347 围观

问买回来的抗体敷育出来的条带为什么会出现跟案例完全不同呢？

dxy_gwrp7ndq

可能是转膜就没转好，或者没洗干净或者没封闭好。而且同一条带曝光多几次结果都可能有差异啦，更何况分开两次跑，影响因素很多的。

1 回答631 围观

问请问免疫细胞和肿瘤细胞共培养怎么操作

dxy_gwrp7ndq

因为淋巴细胞是悬浮生长，而肿瘤细胞一般要贴壁生长，所以可以采用简单的混合共培养的方法；如果是要有效的刺激淋巴细胞，选用合适的DC细胞也很关键；如果是要检测细胞因子的作用，也可采用共培养的方法；总之，目的不同，方法也不尽相同可以尝试这样一个方法,目的是看人外周血细胞是否被肿瘤细胞所刺激：肿瘤细胞贴壁培养，3000拉德照射或丝裂霉素处理使得细胞不再增殖，但仍保持存活，提取人外周血单个核细胞，与肿瘤细胞

3 回答10751 围观

问请问在在western blot过程中的高温变性是必须的吗？什么情况需要变性？什么情况不需要变性？如何避免磷酸化蛋白的降解？

府宅

不一定。要低温操作：室温条件下，磷酸化蛋白很容易被蛋白磷酸酶降解。请勿反复冻融，操作时一定置于冰上。加入抑制剂：组织或细胞裂解时会释放出大量内源性蛋白磷酸酶，它会导致磷酸化蛋白的去磷酸化，因此，必须在裂解液中加入蛋白酶抑制剂和蛋白磷酸酶抑制剂。

3 回答1059 围观

问如何选择合适的诱导剂并设计诱发炎症反应的梯度实验？

府宅

用实验来测定诱导时间比较容易，培养多瓶菌液（起始浓度要一样且要非常小，要来自同一菌株，最好先挑菌富集，然后平均分装到至少每瓶35mL的培养液里），放到摇床上摇，每隔一段时间去测OD600值，画生长曲线，看图画到指数中期时候就可以诱导了。若时间确定，那么可以设置诱导剂浓度为梯度0.1-1.0去测试哪一个浓度是最适的。设置方法和时间是一样的，注意哪些浓度等的变量要一样。温度就设置温度梯度喽，诱导剂浓度

1 回答1812 围观

问求CHIP实验的详细步骤？

府宅

1) 将细胞或组织进行固定（交联）与裂解该步骤是在新鲜组织或活细胞中加入甲醛（终浓度1%），目的是稳定蛋白与DNA天然结合的状态，以免后续的实验步骤破坏这种相互作用。在固定完成后，细胞或组织进行充分裂解。固定时间一般为5-10 min，太长的固定时间将不利于后续的染色质片段化。强相互作用，如目的蛋白是组蛋白，固定时间应短一些：3-5 min。弱相互作用，尤其是间接相互作用蛋白，可适当延长固定时间，

2 回答1129 围观

问组织免疫荧光片子图片杂质比较多，有解吗？

府宅

有些荧光杂点可能是非特异，建议检查一下封闭用的血清或者BSA是否有问题。如果确信荧光杂点不是生物信号，可以利用photoshop，通过调节色阶、通道相减、调节明暗对比度等去掉，但前提是确保足够的信噪比。如果找不到原因的话，还可以尝试将Caspase-3用红色标记，将NEnU用绿色标记，可能会有意想不到的结果。

3 回答1417 围观

问复孔之间的误差可以有多大？想同时做两块板，板1做了标曲，板2可以省掉不做，以板1上的标曲为准吗？

府宅

复孔直接的OD值差别一般应在0.1－0.15。这两板在标准曲线方面的表现是一致的，其他检测步骤对标准曲线的绘制没有影响，如果这样的话，就可以用一个

2 回答690 围观

问请问western显影的时候条带偏离目标分子量较远，但是只有一个条带是什么原因？如何判断是不是目的蛋白？

府宅

有一下原因造成偏离。可以进行免疫肽封闭实验确定是否是目的蛋白。

2 回答312 围观

问wb 条带异常问题的出现原因？

dxy_gwrp7ndq

1、阴性结果的原因1) 二抗条件过低：提高二抗浓度、延长二抗孵育时间或孵育温度2) 一抗条件过低：提高一抗浓度、延长一抗孵育时间或孵育温度3) 抗原过少：提高上样量4) 抗体种属不兼容：一抗species reactivity中是否有需要检测样品的种属来源，一抗与二抗是否相匹配5) 酶活性：二抗上标记的HRP或AP等酶活性降低，如抗体过期或反复化冻等6) 封闭过度或封闭剂不兼容：降低封闭剂浓度、缩

3 回答3998 围观

问加非特异染色阻断剂后是直接甩去即可还是甩去后需要冲洗三次？

dxy_gwrp7ndq

除去PBS溶液，加100μl非特异染色阻断剂，室温下孵育10分钟。即直接甩去，不需要冲洗

1 回答533 围观

问请问一下包埋块切大了怎么办

府宅

最简单的方法就是把组织块修一下，分成2～3块包埋

3 回答558 围观

问间接法酶联免疫反应中如何控制二抗浓度？

dxy_gwrp7ndq

可以分别加入1：2000，1：10000，1：50000 二抗，进行滴定

2 回答572 围观

问请问Elisa实验需要几个技术重复呢？

府宅

ELISA实验要重复三次，每个样本做两个复孔

3 回答5620 围观

问流式连续表达怎么画门？

txs900416

一般会设置对照组，例如荧光减一组，isotype同型对照组，这样根据这种对照组区分阴性表达的上限，这样可区分连续表达分子的阴性和阳性。

3 回答1564 围观

问请问使用辣根过氧化酶（HRP）标记时，是否在后续的封闭液不能加叠氮钠？

府宅

叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性，在含有辣根过氧化物酶的溶液中不可加入叠氮钠。

3 回答988 围观

问wb怎么进行归一化，标定内参蛋白，如何确定上样量？

dxy_gwrp7ndq

你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”，然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量，再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体（内参抗体、目标蛋白的特异性抗体）孵育就可以很放心地做后续分析了。

2 回答4170 围观

问标本固定超过一个星期还有用吗？

府宅

标本放了一周能否使用，还与标本要做何种检查有关。若是做微生物学检查，活检标本放了一周则不能使用，因为微生物学检查需要保证活检标本的新鲜程度，放了一周的标本已经不够新鲜。如果是为了查病理或细胞学检查，不需要保证标本的新鲜程度，这时即使活检标本放了6天也能用。如果在取到标本当时及时进行了固定处理，这种标本可以较长时间的进行保存，保留一个月是仍然可以用的。否则，组织细胞会很快发生溶解破坏，长时间的放置

3 回答4422 围观

问请问Elisa法检测细胞实验中细胞因子的浓度的原理是怎样的呀？

dxy_gwrp7ndq

细胞因子的ELISA检测常采用双抗体夹心的方法进行检测，采用抗同一细胞因子不同表位的两株单克隆抗体，或一个单克隆抗体和一个多克隆抗体。一个抗体用于包被作捕获抗体，另一个抗体标记酶，作为检测抗体。

3 回答1353 围观

问染色最重要的操作步骤是哪个

bigred大红

样本前期处理和敷抗体都是关键步骤。

4 回答890 围观

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