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实验问答

29,033,541 科研人在看

问请问有关于等温滴定量热的相关内容吗？

dxywode

等温滴定量热（isothermal titration calorimetry，ITC）与荧光偏振类似，也是一种研究生物分子间相互作用的先进技术手段。ITC检测方式与化学反应中的酸碱滴定法相似，在ITC测定中，首先将一种反应物置于一个温控样品池中，并通过一个热电偶回路与一个参比池相偶联，样品池和参比池处于相同的外部环境。特定的滴定剂（按实验需要选择）定量滴加到样品池中，当样品与滴定剂发生反应时，样

2 回答719 围观

问流式细胞术巨噬细胞分析

txs900416

一般巨噬细胞流式需要封闭，封闭得好的话是只有一群的，固有层巨噬细胞应该是f4/80阳性，建议楼主封闭完全+染cd11b，可看到双阳的就是巨噬细胞。如果出现中表达和高表达，建议在确定没有非特异性染色的情况下，两群都圈进去

1 回答2824 围观

问怎样减少非特意结合？抗体已定

今天摆烂了咩

抗体浓度过高也可能导致此问题降低抗体浓度，可以减少非特异性条带

3 回答450 围观

问苏木精染色怎么配置？成品试过了，感染背景过厚

郭郭的郭郭

Gill改良苏木素（进行性染色）：配制时，先将2g苏木色精溶于250ml无水酒精，再将17.6g硫酸铝溶于750ml蒸馏水，然后两液混合后加入0.2—0.3g碘酸钠，最后加入15—25ml冰醋酸。此溶液为半氧化进行性苏木素液，不会产生沉淀，氧化膜少。常有人配制此液染不上色或染色较慢，可能是碘酸钠量的原因，可根据气温变化多加一点（气温在30℃时，一般碘酸钠量为0.25g，气温每降低5度，可增加0.

2 回答1924 围观

问免疫组化怎么防止封闭过度

今天摆烂了咩

封闭不充分出现非特异性结合，可以延长封闭时间，同时担心封闭过度导致染色弱，这就需要封闭时间最好不超过十分钟，实验的具体条件最终还是要自己摸索的，可在十分钟范围内自行摸索一下最合适的时间再进行实验

2 回答1845 围观

问请问可不可以同一个共聚焦样品，同时染红光和绿光，然后测共定位情况啊？

dxy_8y6odnaq

可以例如经典死活双染 Calcein AM 和PI 但是需要考虑串色问题（选择合适波长可避免）

4 回答864 围观

问一抗过程中无法足够一和目标蛋白结合 ? 细胞核显色不明显，靶细胞中没有目标蛋白? 切片本身脱蜡不彻底，如何解决?

郭郭的郭郭

1、洗涤不充分，膜没有洗干净。2、封闭不充分，一抗可能直接结合到膜上，造成二抗孵育时在非特异性位点发生结合。3、一抗/二抗浓度太高，出现非特异性结合。要解决封闭不充分这个问题，可尝试延长封闭时间，也可更换封闭液。常用的封闭剂有 5% 脱脂奶粉、5% BSA、血清和明胶等，推荐室温封闭 1 小时以减少背景。另外，脱脂奶粉常含有酪蛋白，由于酪蛋白会结合磷酸化抗体而易产生高背景。因此，检测磷酸化蛋白时建

2 回答374 围观

问如果是做多克隆抗体，是免疫兔子好还是免疫老鼠好呢？如果是免疫老鼠，对小白鼠的品种有要求吗？

郭郭的郭郭

多克隆抗体一般通过免疫接种合适的哺乳类动物而产生，例如小鼠、兔子或者山羊。通常更倾向于采用大型哺乳类动物，因为可以采集更多的血清。一般选择兔子比较多，如果是老鼠的话，对种类一般没有要求。

2 回答1290 围观

问石蜡切片抗体结合是否需要温箱孵育？

c_Yeats

1.一般一抗4℃过夜，二抗室温2.可以脱色后复染看看

2 回答779 围观

问补体激活途径有哪些？有何区别？

此用户已注销

3条途径:经典途径，旁路途经，mbl途径①溶解和杀伤作用：细菌进入机体后，细菌的细胞壁脂多糖可通过替代激活途径激活C3（属非特异性免疫），细菌与特异性抗体结合后可通过经典激活途径激活补体（属特异性免疫）。2.免疫粘附作用：与C3b结合的颗粒或抗原-抗体复合物，有粘附灵长类红细胞或非灵长类血小板的能力。③趋化作用：补体在激活过程中释放的C3a、C5a、C567等对中性粒细胞和巨噬细胞有趋化作用，可吸

3 回答3829 围观

问免疫荧光中荧光信号无细胞形态是什么情况？

dxy_8y6odnaq

封闭时间不够或浓度不够都有可能导致一些抗体非特异性吸附另外在染色过程中需要保证湿润的环境否则也会影响染色

3 回答1154 围观

问包因溶液用什么替代呢

LFF520宣城

HNO3：HCl：H2O=1：1：1配备液替代

3 回答1366 围观

问提取同一批小鼠肠道组织蛋白，蛋白浓度都不低，为了调整上样量，都调整了浓度，为什么有些样品连actin 都跑不出来？

颜渊溪桥

肠道组织属于平滑肌，用b actin坐内参不合适，换个内参gapdh试一下

3 回答1040 围观

问免疫透射比浊法有没有更显著的方法减少效果影响

郭郭的郭郭

透射免疫比浊法是根据抗原抗体结合后引起液体介质浊度改变，使光线透过量减少，在一定范围内，透射光被吸收量与IC量呈正相关，依所测吸光度值推算待测抗原量的分析技术。主要注意抗原或抗体不要量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差；可以减少效果影响。还有就是应维持反应管中抗体蛋白始终过剩；不要受到脂血的影响。

3 回答720 围观

问双向免疫扩散实验结果问题

郭郭的郭郭

根据抗原的成份可有以下三种现象：（1）若二孔中的抗原相同，与相应抗体形成的沉淀线融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，当抗血清中分别含有与抗原相应的抗体时，则形成的沉淀线相交叉，也就是沉淀线弧支线；（3）若两孔中抗原部分相同，抗血清中有各相应的抗体，形成的沉淀线相切。

3 回答1835 围观

问用51cr铬酸钠标记靶细胞

dxywode

首先用培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用50ml RPMI-1640培养液悬浮细胞，置37℃水浴30分钟，以减少非特异的自然释放。离心200×g 10分钟，去上清液。

2 回答968 围观

问免疫电泳检测粪内贾第虫抗原诊断问题

郭郭的郭郭

免疫诊断为辅助诊断，主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接荧光抗体试验（IFA）和对流免疫电泳（CIE）等方法，其中ELISA简单易行，检出率高（92%～98.7%）等特点，适用于流行病学的调查。CIE可达94%，均可诊断粪内贾第虫。

3 回答973 围观

问最多能用几种抗体去筛选t细胞？

颜渊溪桥

我觉得主要看实验目的。胸腺中的不同时期t细胞及亚型可以用cd4，cd8，，cd25等筛选。次级淋巴器官及其他组织中可用cd3画总的t, cd4-cd8等往下画，然后再根据你所需要的亚型表征去泡，比如终末耗竭 pd1+ tim3+，只要流式通道允许，没有固定限制。

3 回答457 围观

问正常人的血清免疫电泳结果：免疫球蛋白（Ig）处于阴极端，离加样孔由近及远依次顺序是什么？

郭郭的郭郭

IgM离阴极端最近，然后是IgA，最后是IgG。

4 回答711 围观

问免疫细胞marker标记及panel确定

颜渊溪桥

如果你主要分析肿瘤样本中的免疫细胞群体，建议肿瘤组织研磨后percoll一下，下层70%，上层40%，离心后最上层是肿瘤细胞，中间是淋巴细胞，底部是死细胞。然后在去测淋巴细胞的胞内因子准一些。如果只染表面，可以不用percoll，但染色封闭处理一下对巨噬及DC等要好一些。

3 回答1738 围观

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