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实验问答

31,542,124 科研人在看

问硫磺素S染色的具体步骤是怎样的呢？

dxy_gwrp7ndq

1．石蜡切片，通过二甲苯和酒精脱蜡至水。2．切片放入0.25％高猛酸溶液中漂染20 minutes 。3.蒸馏水稍洗。4．切片放入白液中漂洗2 minutes 。5．蒸馏水稍洗。6．切片放入封闭液中漂染20 minutes 。7．蒸馏水稍洗。8．切片放入0.25％醋酸液中漂洗5 seconds .9．蒸馏水稍洗。10.将切片裱于载玻片上凉干、玻片保持平放。11．玻片用蒸馏水稍洗。12．滴上硫黄素

1 回答4081 围观

问请问明明BCA定量完了，为什么每次跑出来的GAPDH都不齐呢？还有其他蛋白归一化的方法吗？

今天摆烂了咩

可能因为BCA测定的是组织内总蛋白的量，组织内细胞类型较多的话，测定的某一特定蛋白的浓度会不准确，可以根据各条带的灰度调整下上样量，即调下内参试试。蛋白浓度测定除了BCA法外还有紫外吸收法，双缩脲法，考马斯亮蓝法等等。

3 回答2419 围观

问怎么设计实验用CO-IP（CO-Immunoprecipitation）验证两个蛋白是否互作呢？

txs900416

最基本的方法是用ip级别的抗体钓取一个蛋白，跑wb检测是否钓取的蛋白中是否有另外一个蛋白的存在。如果没有ip级别的抗体，则需要在细胞系中共表达两个蛋白，使得其中一个带tag（例如his，ha，flag等），使用抗tag的抗体钓蛋白，检测另一个蛋白，从而验证蛋白是否互作

2 回答3183 围观

问跑wb的时候经常会出现多条条带，但这些条带的分子量不在对应的位置上是怎么回事呢？

府宅

SDS-PAGE鉴定表达的外原蛋白,分子量和Marker有一定的出入,一般在10kD左右浮动还是可以接受的,也许就是你所遇到的这种情况.不过最终的结果还是要看你的WB结果了;也许有可能是你的蛋白表达过程中提前终止,那就没有办法,只有更换载体

3 回答1173 围观

问请问用脂肪肝样品跑wb如何把脂肪清理的干净一些？目前跑出来的感觉样品不纯

小布丁瑶瑶

1.尽可能的削掉不需要的脂肪组织2.调整组织块的方向使脂肪最后接触刀片3.保证刀片、台面的干净及组织块的冷冻程度

3 回答815 围观

问请问在做western blot,IF,IHC等实验中，二抗可以用鼠二抗吗？

府宅

可以使用鼠二抗，疫学试验中常通过封闭试剂来封闭未吸附蛋白的固相载体部位，以减少非特异性结合背景的影响。如WB 试验中常用5% 脱脂奶粉或者BSA 封闭膜上除转印蛋白占据的其它部位。除了用于封闭未吸附蛋白的固相载体，封闭试剂也被广泛用于封闭其它非特异性结合。如IHC、IF 等试验中，特异性抗体与样本中Fc 受体的结合，以及在IHC 和IF 双染或三染实验中，驴血清也被广泛用于封闭试剂以减少抗体之间的

3 回答693 围观

问免疫组化实验中，常用哪些封闭液？

小布丁瑶瑶

一般的抗体封闭液是5%的脱脂奶粉或者1-10%血清，最好的是二抗来源动物的血清。

3 回答3970 围观

问免疫组化中，什么时候采用柠檬酸修复，什么时候采用EDTA修复？

dxy_gwrp7ndq

高温高压pH6.0柠檬酸盐缓冲液修复，适用于绝大多数抗原。需要用95℃热水浴EDTA（pH9.0）修复20分钟。适合于：CD10、CD138、Bcl-6、MuM1、VEGF、CD31、CD117、CD30、Cyclin D1、TdT、ALK。用柠檬酸修复后，切片需浸泡在修复液中，自然冷却；而用 EDTA 修复后，切片可直接从修复缸中取出，直接进行下一步。用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。

1 回答3750 围观

问免疫切片越薄越好吗？

小布丁瑶瑶

冷冻切片并不是越薄越好，普通组织厚度约6微米即可，过薄，则易造成组织皱缩和镜下细胞核的碎裂。但是淋巴组织由于细胞间质少，切片可达4-5，脂肪组织要8-9方可观察到完整的脂肪细胞。组织结构单一的可薄切，含脂肪多的，结构复杂及硬度较大的可适当厚切。总之，以切出完整，平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带，可避免组织摊片过程中皱褶，保证组织结构的完整及切片的美观。

3 回答2121 围观

问请问，雌雄C57老鼠做在体实验差异会很大嘛？有哪些疾病模型使用雄性C57，那些模型选用雌性C57呢？

txs900416

雌雄会有一定差异，例如，ConA注射的雌鼠肝损伤比雄鼠要重；eae在雌鼠中发病较高和严重，雄鼠则不敏感；器官移植中一般使用雄性c57做受体，因为好补液

1 回答1587 围观

问取器官标本前一定要放血吗？

txs900416

这取决于取标本的目的。例如标本需要提取损伤敏感的蛋白（DAMP）之类，放血可能造成damp的释放增加，此时不应放血，应迅速将样本置于液氮；又例如样本要包埋切片进行染免疫荧光等染色，此时红细胞的染色背景可能会影响实验结果，最好是放血。

3 回答703 围观

问怎么避免抗癌药物对自身造成伤害？

府宅

严格控制抗癌药的用量，可以预防性使用保护性药物，如护肝、护肾的药物

3 回答652 围观

问如何解决容量瓶刻度上方液体沾壁问题

今天摆烂了咩

1.容量瓶清洗至无水珠挂壁，晾干备用2.定容时候悬空3.滴加之后可以静置片刻

5 回答3054 围观

问如何减少免疫组化的非特异性染色

府宅

(1)可以选择购买高质量、高纯度的荧光素二抗。（2)延长血清封闭时间。(3)调整一抗和二抗孵育条件和浓度至。(4)一抗和二抗孵育后的清洗不充分。增加清洗次数和延长清洗时间。

3 回答935 围观

问免疫组化实验中购买的抗体试剂建议浓度在预实验中效果不好，如何调整浓度能节省抗体和实验周期

dxy_gwrp7ndq

为调整到最佳浓度，可进行预实验，通过滴定测试确定适合自身应用的最佳抗体工作浓度

2 回答682 围观

问做小鼠脾脏的胞内因子分析时，应该用什么刺激阻断剂，适合与IL-6和IL-1β的检测？

府宅

可通过收获3天巯基乙酸盐诱发的腹膜细胞，并用1μg/ ml LPS和GolgiPlugTM刺激4小时

2 回答755 围观

问请问做肿瘤的免疫组化实验，需要阳性、阴性对照吗？

小布丁瑶瑶

免疫组化阴性对照一般是需要做的，但是也不是每一种检查都需要做阴性对照的，如果检查不常用的抗体就需要做阴性的对照，如果是常用的抗体就不需要做阴性对照了，只需要做阳性对照就可以了。

3 回答740 围观

问爬山细胞怎么做免疫组化，HE染色技术，详细步骤，谢谢师兄师姐。

dxy_gwrp7ndq

HE染色：（1）先将长有细胞的六孔板用PBS洗3次（2）将六孔板浸入95％的酒精固定15分钟（3）PBS洗2次，每次1分钟（4）浸入苏木素染液，染色5分钟（5）自来水浸洗（6）浸入稀盐酸酒精进行分色，数秒即可（7）自来水浸洗（8）浸入淡氨水中，使胞核蓝化，3分钟（9）自来水浸洗（10）浸入伊红染液，染色6分钟（11）自来水浸洗（12）依次经过70％、80％、90％酒精各1次，95％酒精2次和100

2 回答1032 围观

问请问用CD24-FITC CD44-APC标记肿瘤干细胞用流式检测的时候群体会移动是怎么回事啊，同一个样品先后两次上样群体

Timy最爱柠檬水

如果一批细胞需要重复多次流式检测，最好使用多聚甲醛进行固定，这样才能排除细胞因离体后出现再分化的情况。与此同时，应该在再次检测的时候重新调整电压。

4 回答943 围观

问免疫荧光共定位量化一般采用哪个系数？

简单最重要666

皮尔逊相关系数和及重叠系数。两者作用关系仍然有所不同

2 回答4125 围观

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