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问
核酸检测的假阴性如何解决?
txs900416
具体因素包括:样本质量差,比如口咽等部位的呼吸道样本;样本收集的过早或过晚;没有正确保存、运输和处理样本;技术本身存在的原因,如病毒变异、PCR抑制等。只能多次采样进行检测,并更新技术手段才能避免
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问
wb实验中如何跑出水平的条带?蛋白拖尾现象怎么避免?
dxy_gwrp7ndq
避免拖尾:可以根据情况调整蛋白量,同时降低一抗的浓度,缩短一抗的时间。
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问
小鼠最大采血量是多少
小布丁瑶瑶
看情况以25g的成年小鼠为例,它的循环血量大约为1.8ml。以250g的成年大鼠为例,它的循环血量大约为16ml。
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问
每次做的MTT结果都有点不太一样,但趋势是一样的,除了考虑铺细胞的问题,还可以是什么呢?
三昧骨科
铺细胞前的计数要准确。同时不知道你用的什么细胞,如果是细胞株的话和代就没有关系了。然后你每次用同样试剂的话,加试剂的枪是否准确啊,再就是和个人手法有关系。建议把数据拿给老师看一下,一般都需要重复多做几次的,排除一些不好的实验结果。如果趋势一样,但是最后值差的很多,建议同样条件下重复多做几次,毕竟实验就是需要反复重复的
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问
如何提高实验数据准确性?
小兮的十八天
实验设计无误,保证实验操作步骤标准无遗漏,至少设置三次重复实验。
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问
nlrp3炎症小体激活后贴壁不牢,免疫荧光染色会冲掉怎么办?
府宅
洗的时候注意冲洗力度,如果吸头直接对着细胞并且吹打力度过大,的确能把细胞吸吹下来,尽量避免头直接对准细胞吧,建议贴着孔的侧壁加液体
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问
想问一下大家有观察过PCMV6表达载体和PCDNA3.1表达载体的表达效率差异吗?大概有多少倍呀?
txs900416
这两个载体都是高拷贝载体,表达也都是CMV为启动子,差异不大啊
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问
动物组织的切片做免疫荧光出现非特异性染色的原因是什么?
Kimser
1,染色时间过长,2,抗体浓度过高,3,甚至有时候贪多嚼不烂,一次性做太多切片,出现组织变干的情况,
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问
免疫共定位结果怎么分析?
君君子丶
不需要建立text,直接将网页上的代码ctrl+a(全选)→CTRL+C复制到剪切板就行。在image J 中Plugins→new→在打开的页面中ctrl+V→左上角 file→save as(保存在你能找到的地方就行) 再回去,Plugins→macros→install 找到你刚才保存的文件,打开即可。你就会发现image J下面多了右侧这个血管的图标。
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问
请问大家用什么稀释一抗和二抗呀,脱脂奶粉,TBS,TBST有什么区别?如果条带不好看,怎么判断是不是一抗的问题呢?
txs900416
一般用5%bsa-tbst或5%脱脂奶粉-tbst孵育,tbs和tbst的区别在于tbst中多了一个t,即吐温20,Tween 20 是非离子型去污剂。因为western中所用的膜可以与蛋白质结合,这样的话孵育过程中,抗体是能够与膜非特异性结合的,为了防止以后曝光造成胶片背景太高,在孵育抗体后,混有Tween 20的PBS 能够将非特异性结合的抗体洗掉,增加特异性。看一抗有没有问题建议使用阳性对照
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问
请问在wb实验中转膜后,发现所有的蛋白条带都在,只是颜色变淡了,有什么办法可以解决?
黎咖勒翟
转膜夹松动,下次多加一层滤纸。
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问
请问如何对条带的结果定量能更贴近真是的表达量?定量时,不同泳道的蛋白需要用同样大小的圈吗?
dxywode
不能严格定量,只能互相比较。 无论什么染色法,条带亮度会随着染液多少及染色时间的不同而变化,无法严格定量。 page的作用更多的是看目的条带的大小,以及两个样品中相同蛋白互相比较多少。不能精确算出是多少ug或ng。
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问
免疫组化有什么意义,准确性如何?
梁总的贴身医生
①恶性肿瘤的诊断和鉴别。②确定转移性恶性肿瘤的原发部位,有些肿瘤在发现的时候已经有转移了,而我们却发现的是转移部位,而不是原发部位,这时候免疫组化就可以帮助我们找到肿瘤的原发部位。③对某类肿瘤进行病理分型。④明确软组织(如肌肉、韧带、骨膜、脂肪等)肿瘤的正确组织学分类,明确软组织的诊断,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的。⑤
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问
免疫组化实验,切片厚度多少合适?
梁总的贴身医生
一般组织切多厚是依据实验目的而定的。一般大鼠大脑要做免疫组织化学的话,需要把细胞切开,抗体容易进到胞质(如果是胞核染色则需要进一步核膜打孔,跟细胞膜打孔一样,常用triton x-100),一般神经细胞的胞体的大小差异很大,小的直径仅5~6μm,大的可达100μm以上,结合文献会发现,经常切30um或者20um,这样可以切开多数的细胞
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问
条带为什么跑不出来?
woazan
如果你的抗体没问题(别人跑出来了),那么就是降解的可能性大,蛋白酶磷酸酶抑制剂这些最好换个好的牌子,提取组织蛋白要超声,可以加大上样量与阳性对照
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问
红色蛋白使用什么拷贝数的质粒可以更好的显色?
txs900416
取决于表达及细胞毒性之间的一个平衡,之前一些红色蛋白易形成多聚体且有细胞毒性,所以表达多的容易导致细胞死亡。后来经过改进这些红色荧光蛋白毒性都减弱了,一般来说对于稳转株拷贝数高低无所谓,对于瞬转还是建议用高拷贝质粒
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问
免疫共沉淀的方法更适用于检测哪种物质?对于样本需要怎么样的处理?新手应该注意哪些方面?需要用到的仪器是哪些?
Kimser
适用于:检测兴趣蛋白质,样本:需要加入细胞裂解缓冲液也就是蛋白酶抑制剂,新手注意:每种细胞裂解条件不同,如果没有人带你,可以做对照实验,还有就是注意不要用太多,多看看说明书要求,注意避免污染仪器:离心机,ep管,离心管,电泳仪,电泳槽,色谱仪,刮刀等
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问
做小鼠细胞因子测定实验后多久抽血比较好
txs900416
一般在损伤高峰测,比如Con A注射的小鼠,肝损伤在8-12h,这期间收是没问题的。测血清中细胞因子主要是要检测试剂盒的检测限足够灵敏,另外要每次设置阳性阴性对照,这样可以有效进行比较。
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问
除了空气过滤系统,还有可靠的去除核酸污染清洁剂吗?
府宅
对可疑器用稀酸进行擦拭或浸泡,紫外线照射,对反应液用DNaseⅠ或内切酶进行处理等方法。
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问
细胞RNA提取时trizol的量是多少?
dxy_za0jbge8
300μl细胞液+700trizol
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