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        免疫共沉淀的方法更适用于检测哪种物质?对于样本需要怎么样的处理?新手应该注意哪些方面?需要用到的仪器是哪些?

        相关实验:免疫沉淀

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        雅梅mayzrj

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        2 个回答

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        Kimser

        有帮助

        适用于:检测兴趣蛋白质,

        样本:需要加入细胞裂解缓冲液也就是蛋白酶抑制剂,

        新手注意:每种细胞裂解条件不同,如果没有人带你,可以做对照实验,还有就是注意不要用太多,多看看说明书要求,注意避免污染

        仪器:离心机,ep管,离心管,电泳仪,电泳槽,色谱仪,刮刀等

        user-title

        府宅

        有帮助

        免疫共沉淀(Co-IP)实验成败的关键:实验最需要注意点就是抗体的性质。尤其是多抗的特异性是问题;
        为防止蛋白的分解、修饰,溶解抗原的缓冲液必须加蛋白酶抑制剂,低温下进行实验;
        考虑抗体/缓冲液的比例。抗体过少就不能检出抗原,过多则就不能沉降在beads上,残存在上清。缓冲剂太少则不能溶解抗原,过多则抗原被稀释;
        确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中,而不是由于细胞的溶解才发生的,这需要进行蛋白质的定位来确定。

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