条带为什么跑不出来？
dxy_gamdde0
免疫印记实验中，比如IKKα+β本来应该有两条带出现才对，但是实际只有一条，为什么呢？
磷酸化蛋白总是跑不出来是怎么回事？条件：90V电泳压齐以后120V接着跑，恒压100V转膜100分钟，快速封闭15分钟，一抗孵育过夜，洗膜后二抗四度孵育4小时，为什么就是没有条带呢？
3 个回答
woazan
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如果你的抗体没问题（别人跑出来了），那么就是降解的可能性大，蛋白酶磷酸酶抑制剂这些最好换个好的牌子，提取组织蛋白要超声，可以加大上样量与阳性对照
dxy_gwrp7ndq
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蛋白上样量不足：每条泳道蛋白上样量不超过 20ug，使用蛋白酶抑制剂并设置阳性对照。也可能是组织中目的蛋白含量低
txs900416
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1. ikka+b有可能被降解。
2. wb过程中可能有问题的是二抗四度孵育4h不够，一般二抗都是室温孵育1-2h，此外磷酸化蛋白提取时要注意加入磷酸酶抑制剂，不然也可能降解从而检测不到
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