条带为什么跑不出来？

如果你的抗体没问题（别人跑出来了），那么就是降解的可能性大，蛋白酶磷酸酶抑制剂这些最好换个好的牌子，提取组织蛋白要超声，可以加大上样量与阳性对照

蛋白上样量不足：每条泳道蛋白上样量不超过 20ug，使用蛋白酶抑制剂并设置阳性对照。也可能是组织中目的蛋白含量低

1. ikka+b有可能被降解。

2. wb过程中可能有问题的是二抗四度孵育4h不够，一般二抗都是室温孵育1-2h，此外磷酸化蛋白提取时要注意加入磷酸酶抑制剂，不然也可能降解从而检测不到