请问大家用什么稀释一抗和二抗呀，脱脂奶粉，TBS，TBST有什么区别？如果条带不好看，怎么判断是不是一抗的问题呢？

我认为首先第一抗体就是能和非抗体性抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。可以用加了脱脂奶粉的封闭液，也可以用TBST液。如果显色用的是红外荧光二抗，则只能用TBS液稀释。磷酸化抗体的一抗必须用BSA稀释，可以是1%~5%对于敏感性和特异性差的抗体会有帮助二抗其实没有用BSA稀释的要求，可以用脱脂奶粉稀释。

一般用5%bsa-tbst或5%脱脂奶粉-tbst孵育，tbs和tbst的区别在于tbst中多了一个t，即吐温20，Tween 20 是非离子型去污剂。因为western中所用的膜可以与蛋白质结合，这样的话孵育过程中，抗体是能够与膜非特异性结合的，为了防止以后曝光造成胶片背景太高，在孵育抗体后，混有Tween 20的PBS 能够将非特异性结合的抗体洗掉，增加特异性。看一抗有没有问题建议使用阳性对照跑一次即可观察到一抗的有效性和特异性