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实验问答

25,007,828 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问换新的一管酶，做实时荧光定量复合扩增的HRM曲线总是发现内参跑的不好，峰很低是怎么回事？

bamboopiggy

是不是你内参的引物用的时间比较久坏了？

4 回答550 围观

问qPCR实验重复性问题

天一湖医者

是的，首先qPCR不是很准，特别是对于新手来说。其次，三个平行以上才具有统计学意义，三个生物学重复以上才具有生物学意义。（发表文章时需要）最好能够设置3个复孔,同样的实验再重复3次以上才有可信度.不同的孔之间的差异不要大于0.4-0.5为有效,否则肯定是加样过程出了问题.

4 回答22837 围观

问荧光定量PCR反应体系

bamboopiggy

500ngrna反转后，稀释到200ul，取4ul上样

4 回答758 围观

问pcr扩增曲线有异常，总出现s型曲线

bamboopiggy

检查是不是都是在同一个孔，可能是这个孔被污染了，或者是热板盖歪了

3 回答858 围观

问跑pcr，怎么避免非特异性条带

bamboopiggy

注意annealing temperature，可以适当提高

4 回答678 围观

问PCR的产物总是太少，是什么原因?

bamboopiggy

看看你是不是酶啊，引物啊，或者是模版加的浓度不对

4 回答832 围观

问pcr引物可不可以mix之后保存？

bamboopiggy

可以将pcr引物稀释后，按照1:1的浓度mix保存

5 回答1360 围观

问提取细菌RNA需要去除基因组DNA吗？

bamboopiggy

需要去除基因组DNA，否则对实验结果有影响。

7 回答1426 围观

问验证质粒是否导入感受态是应该做pcr电泳还是直接做测序好呢？

bamboopiggy

都可以，一般会选择pcr鉴定，但是现在有些实验室有钱。就直接送测序

4 回答573 围观

问质粒酶切后的回收可以不跑胶直接PCR回收吗？

迟C迟

不可以，直接PCR产物回收的有好几种片段，不是你要的目的片段，会降低后续实验准确性。

4 回答3719 围观

问如何快速地锁定Meta分析的矛盾点?

天一湖医者

参考下这个，讲的很详细，https://baijiahao.baidu.com/s?id=1730794819467226100&wfr=spider&for=pc&searchword=%E5%A6%82%E4%BD%95%E5%BF%AB%E9%80%9F%E5%9C%B0%E9%94%81%E5%AE%9AMeta%E5

3 回答532 围观

问自己引物设计软件和文献报道不一样

bamboopiggy

只要引物好用，不用管是不是和文献报道的一样，只管用

6 回答771 围观

问rtPCR引物长度336bp可以用作引物吗？

bamboopiggy

可以用作rtPCR的引物，因为你已经找不到更合适的了，产物稍微长一点也是可以的。注意一下你的延伸时间就好

4 回答575 围观

问引物设计提示多条合适，如何从中选择最优的

bamboopiggy

不用，你可以选比较靠前的引物，产物长度在50-200bp左右u

5 回答742 围观

问有没有一款软件可以分析多重荧光定量pcr的引物是否会相互干扰及量化干扰程度？

Eason老歌迷

有的，可以参考https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/

4 回答357 围观

问RTPCR实验高浓度的cDNA会对最终结果造成影响么？

bamboopiggy

模版浓度太高，可能与引物结合不完全，也可能很早就达平台期，看不出差别。一般要求酶和引物是过量的

7 回答1792 围观

问求助，半定量PCR的问题

bamboopiggy

半定量PCR是首先通过确定目标物PCR有限扩增至最大值的最低循环数，进而比较不同样品之间该目标物的PCR扩增产物数量，以此确定样品中目标物的相对数量。也就是说是一个相对值，不是绝对含量。至于第二个问题，完全一样的操作，并不代表完全一样的模版都加进去了，每加一次样，都可能存在误差，甚至没有吸到液体。

5 回答1570 围观

问PCR实验引物设计有什么要求？TM值一般多少最合适？

汤姆卜丽波

1、引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应；2、引物GC含量一般为40%-60%， 45-55%为宜，GC含量过高或过低都不利于引发反应，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近，一般Tm值不超过 5℃。3、引物所对应的模板序列的Tm值在55-80℃之间，最好为 72℃左右。4、引物的延伸是从3′端开始的，不能进行任

5 回答23764 围观

问PCR程序设定是根据什么来的？

shanshan2113

pcr程序设定取决于：1.扩增酶的类型，决定变性温度，扩增效率等；2.扩增引物，决定退火温度；3.目的片段大小，决定延伸时间。

5 回答2836 围观

问定下引物的Tm值范围之后即可定下引物的长度范围吗？

shanshan2113

引物Tm值与引物序列GC含量有关，确定Tm值后，若GC含量高，则引物短，GC含量低，则引物长。

4 回答547 围观

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