Qpcr实验中遇到的问题

把variation太大的孔删除掉，不能用。加样尽量用好一点的枪和枪尖，同一个样品，可以用同一个枪尖加。

三次独立重复，每一次实验中可以剔除一些特别离谱的数值

一般加东西按照从大体积加到小体积的顺序，这样加样准。小体积的东西容易沾在枪头上，所以最好再溶液或中轻轻吹一下。水的体积一般最大，最先加。酶容易变性，要在冰盒中操作，最后加。其他的顺序随便。

解决办法：

1) 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。

2) 加样后及时放入孵箱。

3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

4) 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

5) 标本较多时，请分批操作。