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        如何提高荧光定量PCR实验反应的灵敏度与特异性?

        相关实验:定量PCR技术

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        ksclxn_456

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        3 个回答

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        bamboopiggy

        有帮助

        这个主要取决于你rna提取的质量和你设计的引物的特异性。只要这两个要点把握住了,realtime的结果就不会差。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        1.首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。

        2.RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。

        3.为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。

        4.使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。

        user-title

        未来9

        有帮助

        1、先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。

        2、RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。

        3、为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。

        4、使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。

        5、若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。

        6、设计引物时,避免在引物3’端含有互补序列,避免形成内部发卡结构。

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