有杂合位点，但是出现杂合信号的位置上只出现单一的信号，出现这种情况可能是什么原因造成的？求指点，十分感谢。

这种情况可能是突变比例不太够，不容易测出来

先确定确实有杂合位点，而不是你认为有杂合位点，然后再考虑是不是杂合位点产物的melt curve是一样的。

如果在您认为应该出现杂合信号的位置上只出现单一的信号，那么可能是您样品突变的模板与正常的模板的比例没达到可以测出的浓度。测序反应的信号强度直接与模板的量有关，如果突变的模板所占的比例很低，仪器会自动将它作为背景信号了，很难检测出来。只有当测序反应体系中正常的和突变的模板量比较接近时，才能较可靠地检测到突变体的存在。其次，在同一位置，不同碱基的信号强度一般是不一样的，这样即使突变的模板所占的比例较高时，也不一定能准确检测到突变的存在，因为，测序仪是主要用来测序正常的碱基序列的，软件分析结果时，会尽量提高主峰而将背景信号尽量压低，以得到尽可能好的结果。尊重结果，我们是不会人为将出现单一的信号修改为杂合位点的。