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问
组织样本无法及时进行免疫组化实验,怎么保存最好?
whilt-shirt
可以用组织保存液放-80保存。
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问
对于多色免疫荧光,是同时孵一抗,然后同时孵二抗,还是分开孵育?
whilt-shirt
一般是分开敷育的,这样效果会好一些
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问
为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?或者提出了很多杂蛋白
冷泉港蛋白
分子量太大了,表达不出来;也有可能同时有细胞毒性。1.你的重组蛋白分子量=27KD+130KD=157KD2.原核蛋白表达的分子量大小一般不能超过100KD(含标签);如果不表达,诱导剂浓度,温度,时间的调整方面,意义不大,不会实现从无到有的质变,只是个量变而已。3.如何解决: A.大蛋白很少使用大标签, B.截断表达 C.更换为真核表达系统 D.做实验之前先预研一下:文献和商业化蛋白的厂
4 回答
793 围观
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问
免疫荧光用PBS和PBST效果差别大吗?哪一个更好一些
天一湖医者
个人认为PBS还是要好一些,因为PBST里面含有HCL对实验肯能会有一些影响。做免疫荧光的话一般自己实验室配制的PBS就可以,细胞培养级别就是纯度更高一些,你用分析纯的试剂配制PBS完全可以满足实验的需要了!
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问
抗体是永久有效的吗?还是有一个有效期,然后是有有效期的话,那有效期是多久呢?
天一湖医者
抗体是不是永久有效的,每个有效期都不一样,具体要看抗体类型。
4 回答
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问
那怎么样冻存细胞才能保证细胞能正常复苏,不至于冻存死亡呢?
麻黄连翘赤小豆
在冻存过程中减少冰晶的产生,这样细胞就不会刺破,根据这个目的进行冻存方法的改进。有些细胞是95血清5培养基,还有现成的冻存液都是可以用
4 回答
1076 围观
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问
免疫荧光实验中,怎么改善荧光易淬灭问题
麻黄连翘赤小豆
可加防荧光淬灭剂,或者你速度快点以及在激光照的时候再拍照,不拍的时候移开玻片
3 回答
1180 围观
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问
Elisa的细胞上清液样品可以冻存后再用吗
天一湖医者
可以,Elisa的细胞上清液样品可以冻存后再用。
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1529 围观
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问
做WesternBlot时,提取蛋白后冻存,条带很弱
麻黄连翘赤小豆
说明你这个蛋白已经降解了,建议重新提蛋白
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问
在显影液中显影1分钟和5分钟后,底片漆黑一片,是什么原因呢
balalaLy
要么是胶片本身曝光了,要么是压胶片的时间长了,建议可以同时压4-5张胶片,时间1分钟以内
5 回答
880 围观
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问
如何验证细胞上有无某蛋白的存在
whilt-shirt
可以用WB或者免疫荧光试试,有的抗体是共用的,具体要看抗体的说明书
3 回答
606 围观
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问
请问小鼠眼球取血的量为什么总是很小?
麻黄连翘赤小豆
一般小鼠血量差不多0.5-1ML,眼球摘掉,用力挤压腹部和心脏,还有就是一旦眼球那边凝血,可换另一只眼球,或者用干净镊子把血块弄掉再挤血
6 回答
4713 围观
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问
关于免疫沉淀实验的一个问题?
balalaLy
coip的原理就是用目标蛋白的抗体去拉然后分别用目标蛋白和结合蛋白的的抗体跑wb验证,或者是ip下来之后做质谱验证
3 回答
834 围观
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问
MRC-5细胞复苏后状态极差,比例是5:4:1,是说明书推荐比例,有必要提高血清浓度吗?
whilt-shirt
有可能是没冻好,建议更换成品的冻存液
4 回答
484 围观
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问
前后引物同时加入为什么会P出两条带
n0y0j7
碱基配对不是绝对正确,会有错配的,结合在不同地方,扩增出不同的条带
6 回答
454 围观
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问
小鼠脾分离出来的细胞一次可以孵育四种抗体吗?
balalaLy
可以,比如两个鼠抗两个兔抗,但两个同种属的一抗亚型不一样比如一个是IgGa,一个是IgG2a,然后对应的二抗也是不同亚型。
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380 围观
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问
第一次做免疫荧光,镜下观察只有 DAPI 的蓝光,目的荧光几乎没有,这是什么原因?
此用户已注销
出现这种现象很有可能是抗体比例太低,需提高抗体浓度
4 回答
1294 围观
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问
咨询一下大家有关小鼠NK细胞的问题
Eason老歌迷
鼠源的就行。具体用量你可以参看这篇文献”IL-2及IL-15对小鼠原代NK细胞扩增数量及功能影响的研究”,讲的很详细。
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问
求助 为什么我1000bp的条带pcr产物跑胶跑到了250的位置,之前跑都是正常的
n0y0j7
和之前肯定有不一样的地方,pcr试剂,引物,模板其中总有弄错的
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867 围观
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问
小鼠精原细胞 53BP1免疫荧光染色。
此用户已注销
这精原细胞染色挺好的,图片也很精美
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