对于多色免疫荧光，是同时孵一抗，然后同时孵二抗，还是分开孵育？

一般是分开敷育的，这样效果会好一些

可以同时孵育，只要你之间的种属没有问题，都是对应且不交叉

双标最好采用不同种属来源的一抗，可以同时孵育，如果是同一种属来源，那只能采取顺序法，先标第一种，再标第二种。

可以同时孵育，两种一抗分别按顺序加，相当于做两遍免疫组化。如果这两个抗体所针对的抗原有重叠，即有交叉反应