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问
做wb蛋白组学分析,大家对于相同kd是直接洗脱后重敷显影还是另外做多一条?有方案的大神可以分享一下
静心观照
相同KD的蛋白,如果完全重合做好多做一条或重新跑。当然,也可以洗脱一下重新孵育新的抗体,后者可能会出现前一个抗体没有洗掉,或者连同蛋白完全洗掉的情况。
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问
自制ELISA板测定的数据前两行异常高
土井挞克树
这种情况最可能的原因就是有杂质蛋白污染,建议先排除污染
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问
scfv在膜上不表达
高山云初
无义序列一般不会,影响的因素有几点:1、翻译起始位点现在大部分的表达载体都提供起始位点,所以它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行了优化,一般情况下不需要自己再添加,不过还是要留意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子。2、GC含量表达序列中的GC含量超过70%的时候可能会降低蛋白在大肠杆菌中的表达水平。3、mRNA二级结构在起始密码子附近的mRNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造成翻
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问
羊抗鼠血清制备
高山云初
抗血清的制备程序免疫原的配制1、福氏不完全佐剂( Ferund ' S adjuvant , imcomplete , FIA )100克石腊油与50克羊毛脂置于盐水瓶中充分涡旋混匀,过滤除菌或高压灭菌(10P15分钟),置4℃存放备用。(有市售产品, Sigma )2、福氏完全佐剂( Ferund ' S adjuvant , compelete , FCA )取干粉卡介苗25-250mg于10
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问
噬菌体展示做ELISA结果有疑问,求求救命
huarenqiang5
你的这个情况建议首先排除细菌或支原体污染。
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问
是loading buffer出了问题还是胶出了问题?
dxy_kqm3zpd0
感觉是有漏液,导致两边电流不稳定
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问
ELISA检测困惑
周末也要努力呀
都是相对而言的,与自己的空白组相比看处理组的变化。变化倍数保持一致就可以
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问
纯化了一个病毒蛋白,免疫小鼠,3免后间接ELisa测血清效价,拿了同学的免其他病毒蛋白的血清,发现包被我的蛋白,孵他的血清,阳性,
此用户已注销
不知道你所谓的高是相对什么而言的高,阴性一般是相对数值,选用的波长和抗体的滴度都可能使数值偏高,关键是看你的阳性和阴性的比值是怎么样的,一般要大于2.1才算是正常的阳性。
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问
agrin蛋白转膜的条件是啥啊?试了很多条件都不行
土井挞克树
转膜条件80v,30min就可以将蛋白转印,最多不超过60min,只要marker成功转移到膜上,相应的分子量就转移过去了。
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问
全血放置在4度冰箱里两天还能分离出血清嘛?
sswei
如没有发生溶血的话,放几天应该能看到血清自己析出来。直接离心应该没问题的。
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问
WB转膜液中Tris的作用是什么呢
于小鱼鱼1998
tris能提供碱性环境,然后提供一个缓冲作用
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问
WB中转膜液为什么要添加甲醇呢,其作用又是什么
于小鱼鱼1998
PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的!不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合。小分子及大分子量的蛋白转移时,多加或不加甲醇也是这个目的
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问
请问巯基乙醇为什么可以破坏二硫键,其作用机制是怎么样的?
Keven轩
巯基乙醇具有还原性,可以还原二硫键
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问
SDS-PAGE需要使用蛋白抗体吗?
sswei
SDS—PAGE需要使用蛋白抗体
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问
免疫印迹法和 Western blot具体有什么区别?是同一种吗?
小小翻车鱼
免疫印迹法和Western blot是两种不同的实验方法,尽管它们都是基于免疫学原理的蛋白检测技术。尽管两者有很多相似之处,但它们的操作步骤和侧重点有所不同。1. Western blot:Western blot是一种用于检测蛋白质表达和定量的实验方法。它的基本原理是通过电泳(如SDS-PAGE)分离蛋白质样品,然后将分离的蛋白质转移至硝酸纤维素膜或其他支持物上。接着,通过使用针对特定抗原的特异
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问
WB上样时是不是不用做复孔(和CCK8不一样),只需要组之间和样本之间的重复即可?
dxy_xextz7w2
是的,一般是需要重复三次结果即可
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问
细胞实验WB重复几次?和复孔的关系
dxy_xextz7w2
一般是重复三次,可以是同一个样三次也可以是不同的样三次
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问
谁知道U盘的文件删了又出现了 老是删了又出现是怎么回事呀
胡小赖hu
电脑问题,笔记本一般不会,有的台式机会出现
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问
做蛋白转印时,SDSPAGE胶需要电泳到溴酚蓝跑出来吗?还是可以电泳到蛋白marker条带分开到一定程度就可以停止电泳?
dxy_ls40bam
不需要,根据你的蛋白是否跑开决定跑的时间
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问
为什么在SDSPAGE电泳时,在浓缩胶层,溴酚蓝总是向四处扩散?
balalaLy
可以在溴酚蓝buffer中添加巯基乙醇
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